化瘀泻热通络抵当汤对糖尿病大鼠心肌纤维化TGF-β1和Ang Ⅱ通路及其交互对话的干预研究

The effect of crosstalk between TGFβ1 and Ang II-induced signal transduction pathways plays an important role on myocardial cell hypertrophy and interstitial fibrosis of the diabetes cardiomyopathy (DCM). The syndrome of Yangming blood retention recorded in Shanghan Lun are in accord with the clinical manifestations of DCM found in our early study. The clinically researches also show that Didang Tang, a representative formula of therapeutic principle of removing blood stasis and expelling heat and dredging collaterals, has obviously improved the clinical manifestations of DCM. In the present study, we will explore the mechanism of actions of Didang Tang and its broken prescriptions (removing blood stasis and expelling heat, removing blood stasis and dredging collaterals separately) by research on indicators involved in TGF-β1 and Ang II-induced signal transduction pathways in DCM rats. The purpose of the study is to explore the association between therapeutic principle, prescription drugs, models and signal pathways, to clarify the mechanisms and the main target of the compound, to provide the experimental basis for the treatment on DCM of therapeutic principle reflected in Didang Tang.

TGF-β1和AngⅡ诱导的相关信号转导通路及其相互间的crosstalk作用对糖尿病心肌病(DCM)心肌细胞肥大和间质纤维化病变起着重要作用。课题组前期文献研究发现《伤寒论》之阳明蓄血抵当汤证与上述病变有高度吻合，临床研究亦表明化瘀泻热通络代表方抵当汤对该病变有明显改善。本项目研究在前期化瘀泻热法干预DCM实验基础上，分别以代表化瘀泻热通络的抵当汤及分别体现化瘀泻热、化瘀通络的拆方为研究工具，以DCM大鼠为研究对象，多方位、多水平系统采集TGF-β1和AngⅡ诱导的相关信号转导通路相关指标，研究治法、方剂、药物、模型、信号通路之间的关联，阐明抵当汤作用环节和主要靶点，为化瘀泻热通络治法及经方抵挡汤防治DCM提供实验依据。

糖尿病性心肌病（Diabetic cardiomyopathy，DCM）是糖尿病的重要心血管并发症，其发病机理符合中医瘀热阻络的病机。本课题观察具有化瘀泻热通络作用的经方抵当汤及该方拆方的“桃核配大黄”化瘀泻热、“水蛭配虻虫”化瘀通络配方思路对DCM心肌纤维化病变的防治作用。以DCM心肌间质纤维化及心肌细胞肥大的重要发病机制AngⅡ和TGF-β1及其信号通路的交互作用为切入点，观察其可能的作用环节和靶点。在糖尿病大鼠心肌病造模成功后，以该方的全方及其拆方进行灌胃，并以西药缬沙坦作为对照，8周后处死大鼠取材，检测各组DM大鼠血糖、血清胰岛素含量，心肌病理形态、心肌细胞超微结构，心肌组织TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2、Smad3、Smad7、心钠素（ANP）mRNA及JAK1、JAK2、STAT1，STAT3 mRNA的表达，心肌组织TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2、Smad3、Smad7、心钠素（ANP）及JAK1、JAK2、STAT1、STAT3的蛋白表达，心肌组织血管紧张素Ⅱ（AgⅡ）等指标。结果：HE和电镜显示，化瘀泻热通络的抵当汤全方及其拆方组可减轻糖尿病心肌病的病理损害，以抵当汤全方的作用最为明显；化瘀泻热通络的抵当汤全方及其拆方组均上调心肌组织Smad7 mRNA的表达、下调JAK1、STAT1 mRNA的表达；降低心肌组织TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2、Smad3、心钠素（ANP）及JAK1、JAK2、STAT1、STAT3的蛋白水平，升高Smad7的蛋白水平；降低心肌组织心肌组织AngⅡ含量。表明化瘀泻热通络的抵当汤全方及其化瘀通络的水蛭虻虫、化瘀泻热的桃仁大黄拆方均可通过TGF-β1/ Smads通路抑制心肌纤维化；通过降低心肌组织AngⅡ的含量，抑制JAK/STAT通路，减轻心肌肥大；同时，心钠素（ANP）水平降低，可能参与影响AngⅡ诱导的JAK/STAT通路。该研究证明了抵当汤及其拆方对糖尿病心肌病的心肌纤维化病变都有一定的防治作用，具有化瘀泻热通络综合作用的全方优于单纯的化瘀泻热和化瘀通络。由此证明了化瘀泻热通络是防治糖尿病心肌病有效方法。其作用机制可能与抑制TGF-β1/ Smads通路和Ang Ⅱ诱导的JAK/STAT通路有关。.