基于Lin28/let-7通路探讨滋阴泻火中药对特发性性早熟的治疗机理

Precocious puberty is one of the common endocrine diseases in children, and the pathogenic mechanism is not clear at present. Let-7 is a miRNA family, and Lin28 is a miRNA binding protein. A dual negative feedback path is formed between them. Research shows that Lin28/let-7 pathway is related with Hypothalamic - pituitary - gonadal (HPG) axis starting and Kisspeptin/GPR54 pathway that promote the HPG axis starting. Nourishing "Yin"-removing "Fire" Chinese herbal mixture can delay the development of sexual characteristics in advance and Epiphyseal maturation. This topic use female sexual precocious puberty rat models induced by danazol for the study, and the models are given inhibition and overexpression of let-7a/b miRNA. After sampled at different time points(20/25/30/35/40 days old), detect the expression of Lin28/Lin28b、GnRH、Kisspeptin and GPR54 by the methods of Real-time PCR, Immunohistochemistry and Western-Blot. To explore influence of nourishing "Yin"-removing "Fire" Chinese herbal mixture for Kisspeptin/GPR54 pathway based on Lin28/let-7 pathway, to further study the mechanism of delaying the HPG axis by traditional Chinese medicine.

性早熟是儿童常见的内分泌疾病之一，目前致病机理尚不清楚。let-7是一个miRNA家族，Lin28是一个miRNA结合蛋白，两者间形成了双重负反馈通路。研究显示，Lin28/let-7通路与下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴启动、以及与促进HPG轴启动的Kisspeptin/GPR54通路相关。滋阴泻火中药可延缓提前发育的性征及骨骺成熟。本课题以达那唑诱导的雌性性早熟模型大鼠为研究对象，给予模型let-7a/b miRNA表达抑制及过表达，同时进行滋阴泻火中药干预。在不同时间点(20/25/30/35/40日龄)采样后，利用Real-time PCR、免疫组化及Western-Blot法检测Lin28/Lin28b、GnRH、Kisspeptin及GPR54的表达，从Lin28/let-7通路探讨滋阴泻火中药对Kisspeptin/GPR54通路的影响，深入研究中药延缓HPG轴启动的机制。

性早熟是青春期发育异常提前的一类小儿内分泌疾病, 多种病因均可以引起青春期发育启动的提前。目前, 青春期启动的确切机制尚不完全清楚, 参与其中的调控因子众多。近年来, 下丘脑Lin28/let-7信号通路与青春期启动之间的相关性研究逐年增多, 下丘脑Lin28/let-7信号通路可能是青春期启动的重要调控信号通路之一。本试验发现，通过下丘脑弓状核注射过表达Lin28a慢病毒后, 大鼠阴门开启时间显著延迟、延迟卵巢的发育, 性发育启动延迟。提示过表达Lin28a基因, 上调Lin28/let-7信号通路可导致性发育启动延迟, 即Lin28/let-7信号通路可能与青春期启动密切相关。由达那唑诱导的性早熟模型大鼠随着青春发育的进程中, 在青春期启动后, 下丘脑Lin28、Lin28b mRNA的表达改变和正常发育大鼠相比, 有显著性统计学差异。结果提示Lin28/let-7信号通路可能参与了性早熟的发病过程。滋阴泻火方可以从转录水平调控Lin28/let-7信号通路的改变, 使得大鼠下丘脑Lin8b mRNA水平改变, let-7a、let-7b miRNA水平改变; 滋阴泻火方组大鼠阴门开启时间推迟, 27日龄及35日龄时检测血清LH、E2、FSH水平改变, 子宫、卵巢发育落后, 结合其分子水平的改变, 滋阴泻火方延缓大鼠青春期启动的机制可能与中药抑制Lin28/let-7信号通路相关。