VEGF介导骨髓来源的内皮祖细胞修复急性肺损伤微血管组织及机制研究

急性肺损伤室临床常见危重病症，广泛肺微血管内皮细胞的坏死、凋亡及功能失调是其最早表现。本研究建立内毒素诱导的急性肺损伤模型和骨髓移植模型，采用FISH染色体鉴定技术和免疫组化技术，证实骨髓来源的内皮祖细胞参与肺损伤微血管组织修复；然后将受损与正常微血管内皮细胞，与骨髓来源的内皮祖细胞共培养，检测内皮祖细胞是否只与受损内皮细胞黏附；再以RNAi工具下调VEGF的表达，观察Ad-siRNA-VEGF转染的内皮祖细胞和VEGF转染的内皮祖细胞分别与内毒素损伤的肺微血管内皮细胞共培养，并将Ad-siRNA-VEGF作用与大鼠，通过体外和体内实验检测VEGF能否介导EPCs与受损内皮细胞定向黏附的。最后将Ad-siRNA-MMP-9作用于大鼠，将转染具有高分泌VEGF的内皮祖细胞自体移植，探讨MMP-9在VEGF介导内皮祖细胞参与血管损伤修复中的作用。

研究所采用的经由BALB/c小鼠骨髓单核细胞诱导分化以获得EPC的方法可行。在培养过程中，细胞先后显示出“集落样”生长和“铺路石”样生长两种生长形态，并可观察到细胞呈现线状、管状排列生长。而免疫荧光、流式细胞检查及细胞功能检查均证明了所培养的细胞为内皮祖细胞。本研究为后续的细胞移植实验奠定了实验技术基础.我们从实验中知道，10ng/ml和100ng/ml在今后的体外实验中是合适的，因为在此浓度，EPC对LPS是易感的。我们进一步研究EPC在LPS诱导的ALI中所起的作用。在LPS诱导ALI之后的8小时，EPC具有活性，随后恢复正常。体外实验中，LPS诱导之后，EPC增殖能力提高，衰亡率下降，黏附功能下降，在体内实验中，脂多糖诱导ALI后，EPC显示集落数降低，增殖能力下降，衰亡率下降，黏附能力是先上升再下降。.对ALI小鼠行外源性EPC移植治疗，输入体内的EPC可定向迁移并粘附于受损的肺毛细血管内皮位点，直接参与肺毛细血管内皮修复及重建，维持肺毛细血管内皮完整性，减少炎症细胞向肺间质及肺泡内的浸润及对肺组织的炎性损伤。同时，外源性EPC治疗提高了肺组织内SDF-1α、VEGF及eNOS含量，促进了内、外源性EPC向受损肺组织归巢及受损肺组织内的血管新生。.动物实验结果显示：EPC&EPO联合治疗较单纯EPC移植治疗有着更为显著的肺组织保护作用。EPO通过PI3K/Akt信号通路促进了EPC的增殖、抑制其凋亡，并对利用外源性EPC移植治疗ALI的疗效有着显著的促进作用。