新型瘦肉精痕量残留的表面增强拉曼散射免疫层析检测及其机理研究

In recent years, the emergence of some new type of lean meat powder, make the animal food safety meet a new hidden trouble. To strengthen the monitoring methods, the high sensitive rapid detection technology is necessary. This project intends to select the new type lean meat powder（clonidine cyproheptadine and baclofen）as research objects, analysis molecular structure and remould the antigen to prepare artificial antigens, after animal immunization, using hybridoma technology screening the sensitive and specific monoclonal antibody. Based on stability antibodies, combined the technology of surface enhanced Raman scattering and immunochromatography assay, use competition model to construct a surface enhanced Raman scattering-immunochromatography method. This project research on the Raman tag immune probe preparation and the interaction between components through spectroscopy method, transmission electron microscope, scanning electron microscope and so on, explore the mechanism of effective enhanced Raman scattering, optimize the test components and sample processing conditions, make an intensive study of surface enhanced Raman scattering-immunochromatography. This project research results will apply to animal food safety rapid monitoring, has strong theoretical significance and use value.

近年来，一些新型瘦肉精的出现，使动物性食品安全出现新的隐患，为强化监控手段，研究高灵敏快速检测技术尤为必要。本项目拟以可乐定、赛庚啶、巴氯芬等新型瘦肉精类药物作为靶标，分析分子结构并通过抗原改造合成人工抗原，经动物免疫后，利用杂交瘤细胞技术筛选灵敏特异的单克隆抗体。在获得稳定抗体的基础上，结合表面增强拉曼散射技术和免疫层析技术，采用竞争模式构建检测痕量新型瘦肉精的表面增强拉曼散射免疫层析方法。本项目通过光谱学、透射电镜、扫描电镜等手段系统研究拉曼标记免疫探针的制备及各组件相互作用，探索高效增强拉曼散射的机理，优化试纸组件及样品处理条件，对表面增强拉曼免疫层析检测进行深入研究。本项目研究成果将适用于动物性食品安全快速监控，具有较强的理论意义和实用价值。

饲料中的非法添加以及动物性食品中的兽药残留是养殖安全与食品安全的重要威胁，尤其是一些新型违禁添加物或替代物的出现，给动物性食品安全监控监管工作带来了新的挑战。因此，急需构建痕量快速检测技术体系，与传统确证方法互补，以提高监控效率。本项目以新型瘦肉精类药物为靶标，通过制备灵敏特异抗体，利用免疫分析技术与表面增强拉曼散射技术，解决新型瘦肉精痕量残留快速检测技术中的关键问题，并进行了其他相关研究，取得的主要研究成果包括：（1）制备了新型瘦肉精药物的人工抗原，经免疫小鼠、细胞融合，成功筛选到稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株，利用体内诱生腹水法制备的可乐定单抗效价高于1:512000，亚型为IgG1型，IC50为0.217ng/mL，且具有较高的亲和力，为新型瘦肉精痕量残留检测方法的建立提供了良好的抗体保障。（2）建立了快速检测可乐定的ic-ELISA方法，该方法灵敏度高，检测猪尿样品的LOD和LOQ分别为0.033ng/mL和0.054ng/mL，检测猪肉样品的LOD和LOQ分别为0.061ng/mL和0.096ng/mL，且具有良好的特异性、准确度和精密度，为实际样品中新型瘦肉精残留监控提供了性能良好的检测方法。（3）构建了高效、快速、灵敏的可乐定免疫层析检测方法，并在此基础上制备拉曼标记免疫探针，探索高效增强拉曼机理。通过优化样品处理条件达到了痕量检测，目测LOD为2.5ng/mL，机读LOD（IC10）0.202ng/mL，添加回收试验表明该方法具有良好的准确度和精密度，为新型瘦肉精痕量残留的半定量和定量快速筛查提供了高效检测工具，具有较强的实用价值。