社区MRSA的流行病学研究及其可移动致病岛相关的病原学解析

在我国，社区分离甲氧西林耐药性金葡菌(CA-MRSA)的流行病学研究尚未大规模开展。本项目拟应用SCCmec基因岛分型，脉冲场凝胶电泳（PFGE），多位点序列分型（MLST），抗生素耐药谱，毒素基因谱等方法从基因组型和表现型两方面揭示地域性CA-MRSA的流行病学特点；应用PCR组合鉴定CA-MRSA中PVL噬菌体类型，解析新型PVL噬菌体的基因组全序列；溶原性转换实验探讨PVL致病岛在具有特定基因组型的CA-MRSA菌株间转移的机制；利用Northern印迹杂交和反向被动乳胶凝集实验检测PVL毒素在蛋白水平和RNA转录水平的变化，明确不同类型抗生素、抗生素浓度和抗生素组合对金葡菌PVL致病岛的调控机制；制作肺炎动物模型，观察抗生素作用下小鼠肺组织病理变化，探讨在体实验中抗生素应用与金葡菌毒力增强的相关性。本项目从流行病学和病原学角度解析CA-MRSA，是与临床实践紧密结合的基础性研究。

紧密围绕我国东北地域社区分离甲氧西林耐药性金葡菌（MRSA）和医院内分离凝固酶阴性葡萄球菌的流行病学研究，应用多种分子生物及微生物学方法（包括SCCmec基因岛分型、脉冲场凝胶电泳（PFGE）、多位点序列分型（MLST）、抗生素耐药谱、丝裂霉素诱导原噬菌体、噬斑杂交、毒素基因谱、PAP-AUC解析法等），从基因组型和表现型两个方面揭示了分离菌株的流行病学特点，首次证明了金葡菌在医科学生鼻腔中的高定植率，提供了MRSA的定植率从2008年的4.5%上升到2009年的13.7%的数据，同时明确了促进金葡菌在健康人群中鼻腔定植的一系列危险因素。而且，本研究证实医学生所携带的新型的具有伸长形头部的PVL噬菌体（φSa2958-like PVL phage）能够借助不同类型金葡菌载体，在社区和医院环境中散播具有高致病力的PVL毒力基因, 本研究将对预防和控制耐药性葡萄球菌在社区和医院环境内的大范围流行和蔓延有积极的作用。另外，本项目通过对医院及特定病房爆发流行的凝固酶阴性葡萄球菌对万古霉素耐药性的调查，强调了异质性万古霉素耐药葡萄球菌的发生与临床患者应用β-内酰胺酶类及糖肽类抗生素等（即细胞壁刺激性）抗生素经验性治疗相关，具有特定克隆型的耐糖肽类药物CoNS菌群已经在医院内悄然流行，强调了医院内连续监测凝固酶阴性葡萄球菌对万古霉素和替考拉宁MIC值变化的必要性。历经三年的不懈实践与探索，我们顺利完成了研究计划，取得了一系列有特色的研究成果，发表了三篇SCI论文，并在国家核心期刊(中华流行病学及中华微生物与免疫学)等杂志上发表中文论文11篇。而且，后续一篇关于社区和医院内MRSA流行病学特征比较的论文已经投稿给Canadian Journal of Microbiology杂志，现为审稿状态，另外一篇关于异质性万古霉素耐药金黄色葡萄球菌筛查及耐药机制解析的论文已经完稿，不日也将投出去。