rAAV基因药物口服吸收机制

自1998年首先证明重组腺相关病毒(rAAV)基因药物的口服可行性后，针对多种疾病的口服rAAV基因药物得以研究并取得很好的临床前结果。但其口服吸收机制尚未阐明,制约了其口服制剂和临床研究的进一步开展。在对前期研究结果和他人文献分析的基础上,本课题提出rAAV基因药物口服后主要经跨M细胞转运方式摄入，然后转运至肠道固有层靶细胞,并长期表达转基因产物，其它吸收途径在一定条件下也可以发挥重要作用。本课题通过M细胞和Caco-2 细胞Transwell模型,以及在体兔肠袢结扎模型，综合运用分子生物学、免疫学、药代动力学和药剂学技术手段，对rAAV基因药物的胃肠道摄取通路，特别是影响rAAV基因药物跨肠细胞转运的关键因素进行分析，发掘可以提高rAAV基因药物在胃肠道稳定性、并促进其口服生物利用度的制剂学措施，为今后rAAV基因药物的优化、口服给药系统的开发以及临床合理用药提供指导作用。

自1998年首次证明重组腺相关病毒基因药物的口服可行性以来，针对多种疾病的口服rAAV基因药物得以研究，并取得很好的临床前结果。但其口服吸收机制尚未阐明，制约了其口服制剂和临床研究的进一步开展。在对前期研究结果和他人文献分析的基础上，本课题提出rAAV基因药物口服后主要经跨M细胞转运方式摄入，然后转运至肠道固有层靶细胞，并长期表达转基因产物，其它吸收途径在一定条件下也可以发挥重要作用。.本课题通过M细胞和Caco-2细胞Transwell模型，以及在体肠袢结扎模型，综合运用分子生物学、免疫学、药代动力学和药剂学技术手段，对rAAV基因药物的胃肠道摄取通路，特别是影响rAAV基因药物跨肠细胞转运的关键因素进行分析，发掘可以提高rAAV基因药物在胃肠道稳定性，并促进其口服生物利用度的制剂学措施，为今后rAAV基因药物的优化，口服给药系统的开发，以及临床应用提供指导作用。 .实验结果：.（1）在Coca-2单细胞层模型及M细胞单细胞层模型，rAAV基因药物可以转导Caco-2单细胞层，但不能跨越Caco-2单细胞层。rAAV基因药物不仅可以转导M细胞单细胞层，还能跨越M细胞单细胞层。说明跨M细胞转运是口服rAAV基因药物体内吸收及表达的重要基础。.（2）小鼠口服rAAV基因药物后，rAAV基因药物可以转导肠道上皮细胞和肠道固有层细胞，在肠道派氏结内还检出密集分布的rAAV基因药物。说明肠道派氏结之上密集分布的肠道M细胞，是口服rAAV基因药物进入体内深层细胞及组织的重要入口。.（3）小鼠口服rAAV基因药物后，不仅可以转导肠道细胞，甚至还可以转导远端的肝细胞。提示rAAV基因药物可能经血液循环或淋巴循环系统转运至身体其它部位。鉴于本研究仅在肝内检出转基因的表达，门静脉循环可能是口服rAAV基因药物进入肝脏的运转途径。.（4）采用免疫刺激手段激活肠道M细胞的产生，可以提高口服rAAV基因药物的转运效率，提示通过生物药剂学手段有望提高其生物利用度。