SIRT1对猪骨髓间充质干细胞成脂分化的控性机制

沉默信号调节子1（SIRT1）是最近发现的Sirtuins家族的重要成员，一种典型的成脂负调控因子，在成脂分化中具有重要调控作用。本研究似以猪骨髓间充质干细胞（MSCs）成脂分化为模型，通过免疫细胞化学、基因转染、定量PCR、RNA干扰、酵母双杂交、电泳迁移率变动实验（EMSA）、染色质免疫共沉淀（ChIP）等方法，系统观察MSCs成脂分化过程中细胞和亚细胞（包括脂肪滴的大小和数量等）的形态变化，分析脂肪细胞分化标志因子基因的表达水平，MSCs细胞成脂过程中SIRT1及其相关基因的时空表达规律，SIRT1过量表达或Knock-down对MSCs成脂分化的影响，SIRT1 基因的上下游调控因子及调控机制。以解析SIRT1基因表达与MSCs成脂分化调控的分子机制，为猪干细胞成脂分化及调控分子基础的进一步阐明提供依据。

项目在成功分离梅山猪骨髓间充质干细胞(MSC)的基础上，分析了该细胞的生长及形态特征，多能性；完成了MSCs细胞的成脂分化，构建了猪MSCs细胞的成脂分化细胞模型；并在此基础上对SIRT1调控猪骨髓间充质干细胞成脂分化及其相关机制进行了系统研究，获得了一下研究成果：①梅山猪SIRT家族基因1-7的克隆、结构及物种进化以及组织表达谱的分析比较;②猪SIRT1-2基因启动子及上游调控因子分析，包括克隆SIRT1基因5’侧翼4993bp的序列和SIRT2基因5’侧翼2876bp的序列，并已做转录因子结合位点分析；SIRT1部分表位编码区的原核表、多克隆抗体制备，SIRT1、SIRT2真核表达载体和RNAi载体构建；③SIRT1基因的表达及调控：转录及翻译水平的分析表明，LPS与Resistin均可下调SIRT1的表达，但LPS的下调作用可被SIRT1的激活剂白藜芦醇抵消，而Resistin对SIRT1的下调作用不能被白藜芦醇所抵消，这表明LPS和Resistin对SIRT1的下调作用可能具有各自的途径;④SIRT1基因的敲减分析;⑤SIRT1在脂肪细胞分化过程中的表达调控;⑥葡萄糖介导的SIRT家族基因的表达调控；⑦Resistin通过Visfatin及SIRT1下调靶基因PGC-1α的表达，导致细胞衰老;⑧SIRT1使PGC1a发生去乙酰化而增加线粒体数量;⑨SIRT1上游基因Visfatin的启动子调控;⑩KLF15对SIRT1上游基因Visfatin启动子调控。.项目研究成果在《Hepatology.》、《Endocrinology》、《Mol Cell Endocrinol》、《PLoS ONE》等SCI刊物上发表学术论文16篇（IF：59.437），国际会议特邀报告２篇，参加国内学术会议11人次；培养毕业研究生19名，其中博士生5名，硕士生14名。