神经生长因子及其前体（proNGF/NGF）对烧伤创面修复的影响

神经是调控创面愈合的重要因素，我们研究发现神经构筑与创面愈合具有相关性，而NGF可增加神经构筑、促进创面愈合；有研究发现proNGF具有促进凋亡的作用。因此，proNGF/NGF可能是将修复细胞增殖、凋亡进行平衡调控的理想选择。本项目拟检测伤区组织内proNGF/NGF的表达水平，分析proNGF/NGF与创伤修复的相关性；然后通过体外实验观察proNGF/NGF对成纤维细胞的影响机制；并通过动物实验观察不同给药方案时proNGF、NGF对创面愈合的影响。探讨促进创面愈合速度与质量双赢的可行性，为新药开发及临床治疗提供新的思路。

影响创伤愈合进程及其质量的因素是多方面的，神经因素在创伤修复过程的作用日益受到重视。课题组前期发现创面愈合过程中神经生物肽合成增加，因此选择神经生长因子及前体（proNGF/NGF）来研究皮肤神经功能与创面愈合的关系。. 首先，本课题从免疫组化、mRNA表达和蛋白水平发现sortilin 受体表达量在瘢痕疙瘩成纤维细胞中明显低于正常皮肤成纤维细胞(P < 0.05)，p75受体在瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞中表达差异无显著性意义；proNGF 在正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中的表达均呈阳性，表达位于3 种组织的表皮和成纤维细胞，免疫组化和Western blotting 结果均显示，增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中proNGF 的表达均低于正常皮肤组织( P＜0.05)。其次，以烫伤大鼠的创面为模型，检测了NGF、神经生长因子功能性受体TrkA及降钙素基因相关肽CGRP阳性神经纤维在深II度烫伤愈合过程中的表达与变化，发现伤后0天NGF、TrkA的含量增高、CGRP含量降低，均与正常皮肤含量有显著性差异，在伤后7d NGF、TrkA的含量达最高峰，之后逐渐下降；CGRP含量明显高于正常皮肤，之后继续增高，到伤后21d达最高峰，伤后28d NGF、CGRP仍明显高于正常皮肤（P＜0.05），TrkA降至与正常皮肤无显著性差异。分布的位置由真皮深层向真皮浅层迁移。同时，蛋白半定量分析示β1、P75、CK19在皮肤愈合过程中逐渐升高，明显高于正常皮肤; CK10在皮肤愈合过程中先降后升，明显低于正常皮肤。最后，本课题利用基因转染技术，构建sortilin 高表达KF细胞模型，发现sortilin 高表达能够明显抑制KF细胞增殖，促进其凋亡，在加入proNGF后效果更显著，并且其作用机制与NF-κB通路和bax蛋白相关；建立P75高/低表达人表皮干细胞（hESCs）模型，发现P75可明显抑制hESCs凋亡，加速细胞周期转换。. 本课题初步阐明了创面愈合过程中，以proNGF/NGF为核心的神经肽的变化规律，研究了sortlin、p75等配体对成纤维细胞生物学行为的影响，并且对p75表皮干细胞的调控做了初步研究。本课题为创面愈合的调控从神经学角度提供了新的理论基础和线索，为促进创面愈合新药开发提供基础支持，为达成理想修复提供新的思路。