基于"搏脉痹躄"研究痰瘀同治法调控线粒体裂变介导糖尿病血管病变的机制

根据《黄帝内经》"搏脉痹躄"理论制定的痰瘀同治法，临床研究发现其代表方丹瓜方作为院内制剂能有效防治糖尿病患者的血管病变，但疗效机制不明。预实验证实其有效保护血管和抗氧化。线粒体动力学的核心是裂变与融合的动态平衡。高糖使线粒体裂变超过融合是糖尿病启动血管并发症的关键。本项目通过三项体外实验、一项转基因小鼠糖尿病动脉硬化复合模型的体内实验，围绕线粒体裂变的病理生理机制，以电子显微镜、Western blot、FCM、2D-DIGE、Apo-ONE 均质检测技术、线体粒原位重建技术等，从线粒体呼吸链、膜电位、ｍitKATP、细胞凋亡机制等多角度，阐释痰瘀同治法有效干预糖尿病血管病变的机制；并以微阵列杂交技术、差异显示法、SAGE技术等基因分析方法揭示其对多个相关基因的调控。最终揭示痰瘀同治法的疗效机制并丰富《黄帝内经》的内涵。

糖尿病血管病变是2/3糖尿病患者的死亡原因。血糖过高是糖尿病发生血管病变的根本原因，早期强化降糖并尽可能达标是现代医学防治糖尿病血管病变的基本手段,但三大国际著名研究ADVANCE（强化降糖、降压对2型糖尿病血管病变防治研究）、ACCORD（控制糖尿病心血管危险因素行动）、VADT（美国退伍军人糖尿病研究）又证实,强化降糖对于病程长、老年、合并心血管病变及其它心血管危险因素的糖尿病者，不但无益反而可能有害，因为强化降糖增加患者的全因死亡率。这就是说，按照现代医学研究结论，血糖高会损伤血管并引起血管病变，需要降糖。但是强化降糖又增加患者的死亡率！这是现代医学面临的严重悖论。根据《黄帝内经》，认为动脉粥样硬化的基本病机是“搏脉痹躄”，也就是痰瘀互结、痹阻血脉。通过对痰瘀同治法防治糖尿病动脉硬化机制的研究，有可能使其成为突破现代医学强化降糖悖论的一个方向。.本项目通过离体和在体实验研究，研究了痰瘀同治法对高糖培养血管内皮细胞线粒体功能的保护作用、对血管内皮细胞mitoKATP活性的调控作用、和对线粒体裂变诱导内皮细胞凋亡的保护作用，以及痰瘀同治法对转基因ApoE-/-糖尿病小鼠血管病变的防治作用。研究结果表明 丹瓜方显著升高Bcl-2 mRNA表达水平和Bax表达水平，并调节Caspase-3水平，稳定线粒体膜电位，调节能调控线粒体膜电位的线粒体钠钾ATP泵活力，通过调脂、降糖、抗氧化、调节多种细胞因子表达水平、保护线粒体呼吸链等机制，以保护线粒体功能、抗线粒体裂变。同时研究还表明，痰瘀同治丹瓜方具有显著抗动脉粥样硬化、抗增殖、抗凋亡作用，对糖尿病心脏细胞间信息传导具有重要良性影响，有助于抑制心率失常、维持心脏血管的良好功能状态。此外，研究还发现痰瘀同治丹瓜方具洋地黄样改善心脏功能、降低心脏耗氧作用，但不具有洋地黄阻滞心脏传导的副作用；也具有显著的抗脂肪肝、保护脑功能等作用。这些研究表明，痰瘀同治法具有调控线粒体裂变来防治内皮细胞凋亡、保护血管细胞功能的作用，同时表明，中药复方多层次、多靶点作用和具有多效性特点，通过这些作用来实现“高糖无害化”，是痰瘀同治法有效防治糖尿