Foxq1调控TGF-β1介导上皮间质转化过程影响miR-124抑制鼻咽癌转移的机制研究

Foxq1 is a member of Fox transcriptional regulator families. Recent studies have shown that Foxq1 was involved in the pathogenesis of human tumors. However,there is on research about the role of Foxq1 in the NPC. In previous work, we found that miR-124 targeting Foxq1 inhibited the ability of metastasis of nasopharyngeal carcinoma. However, There is no study that how does Foxq1 regulate the metastasis of nasopharyngeal carcinoma as a transcription factor. It was confirmed that Foxq1 was upregulated in tissues and cell lines.Epithelial-mesenchymal transition (EMT) phenomenon was observed after down-regulated miR-124 or Foxq1 in the NPC cells and down-regulated miR-124 or Foxq1can reduce TGF-β1 expression. We hypothesized that Foxq1 regulates TGF-β1-mediated EMT to influence miR-124 inhibiting the metastasis of nasopharyngeal carcinoma.This study will confirm miR-124 and Foxq1 consistency with EMT markers are present and analyze the correlation with clinical features of nasopharyngeal carcinoma in tissue samples.Through in vivo and in vitro experiments,we clarify that Foxq1 mediateing TGF-β1 signaling pathway regulates epithelial-mesenchymal transition to influence miR-124 inhibiting the metastasis of nasopharyngeal carcinoma.The downstream genes of TGF-β1 signaling pathway are detected and comfirmed by dual luciferase reporter and co-immunoprecipitation method The study would provide a new theoretical basis for the development of NPC.

Foxq1是Fox转录调控因子家族中成员，Foxq1的表达失调参与了肿瘤的发病机制。在前期工作中，证实了miR-124靶向Foxq1抑制鼻咽癌的转移能力，然而Foxq1作为转录因子怎样调控鼻咽癌转移分子机制未见研究，我们发现Foxq1在鼻咽癌组织及细胞系中表达上调，过表达及干扰miR-124或Foxq1后鼻咽癌细胞存在上皮间质转化（EMT）现象且降低TGF-β1表达。为此提出Foxq1调控TGF-β1介导EMT来影响miR-124抑制鼻咽癌转移的假设。本研究将在鼻咽癌组织中证实miR-124、Foxq1与EMT标志物存在一致性，通过体内外实验证实Foxq1调控TGF-β1参与上皮间质转化来影响miR-124对鼻咽癌转移能力。最后利用双荧光素酶报告基团及免疫共沉淀方法阐明Foxq1调控TGF-β1介导上皮间质转化影响miR-124对鼻咽癌抑制作用的分子机制，为研究鼻咽癌转移提供新的理论依据。

研究背景：.肿瘤的远处转移和局部复发是鼻咽癌临床治疗中的难点，且一旦发生转移后即使采取合理的放化疗干预，也无法获得理想的疗效。血管生成拟态（VM）是区别于经典内皮依赖性血管生成的一种全新的肿瘤血液供应模式，与肿瘤的远处转移密切相关。本课题组前期研究已证实Foxq1在鼻咽癌中作为重要的致癌基因，与鼻咽癌的发生发展密切相关，但Foxq1与VM之间的关系尚未得到证实。Foxq1是否通过调控VM形成影响鼻咽癌的生长转移及其具体调控机制值得进一步研究。.实验方法:.采用免疫组化(IHC)方法对114例鼻咽癌患者标本中Foxq1、EGFR和VM的表达进行定量分析。使用体外3D培养的方法检测鼻咽癌细胞株VM形成能力，采用qRT-PCR、western blot和免疫荧光技术验证鼻咽癌细胞株相关基因表达水平。在体内动物实验，我们使用裸鼠皮下异种移植瘤模型和肺转移模型验证Foxq1、EGFR、VM和鼻咽癌转移之间的关系。为了研究Foxq1与EGFR的具体机制，我们采用双荧光素酶报告基因实验和CHIP实验进一步验证Foxq1与EGFR的具体机结合位点。.实验结果:.Foxq1在鼻咽癌组织中的表达明显高于对照组鼻咽炎组织，且在114例鼻咽癌组织中，VM与Foxq1、EGFR的表达及鼻咽癌TNM临床分期明显正相关。同时，我们发现VM阳性的鼻咽癌患者预后较差。此外，通过体外和体内实验，我们证实Foxq1通过调控VM形成促进鼻咽癌生长转移。同时EGFR抑制剂(尼莫单抗或厄洛替尼)可有效抑制Foxq1介导VM形成及鼻咽癌转移，且抗egfr和抗vegf药物能协同发挥更好的鼻咽癌抑制作用。荧光素酶报告基因和CHIP实验结果显示，Foxq1可以直接与EGFR启动子区结合并调控EGFR转录。.结论:.综上所述，Foxq1可以直接与EGFR启动子区域结合，通过调控EGFR信号通路诱导VM形成，促进鼻咽癌转移。本研究为鼻咽癌的抗VM治疗提供了新的理论支持和新的靶点选择。