蛛网膜下腔出血后脑微血管功能障碍以及NADPH氧化酶来源的氧自由基在其中作用的实验研究

蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）后的脑微循环障碍可影响患者预后，但目前对其机制研究甚少。本课题拟在前期研究基础之上应用闭合型颅窗，实时、直观的观察SAH后脑微血管形态及功能改变；在此基础上，采用活体荧光染色的方法观察血管壁及周围氧自由基产生情况，并应用基因敲除小鼠来进一步研究NADPH氧化酶（中枢神经系统中氧自由基的主要来源）在SAH后脑微血管功能障碍中的作用；此外，本课题还针对NADPH氧化酶这一靶点应用相应的抗氧化药物（选择性抑制剂），观察其对SAH后脑微血管功能障碍的改善作用，为今后针对该靶点治疗奠定基础。本课题在应用先进、直观的实验方法明确SAH后脑微血管功能障碍的基础上，进一步剖析其机制，这将丰富SAH研究领域的研究内容和实验手段，并为改善SAH后微血管功能障碍、提高SAH患者的治疗效果提供潜在的治疗靶点。

本项目成果主要分为四部分内容：.1）闭合型颅窗的制作.在活体动物中成功的制作并改进了适合反复观察脑微血管功能的闭合型颅窗。..2）各种小鼠蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）模型的制作.不同的SAH对脑微血管功能的影响是不同的，所以制作了不同的小鼠SAH模型，特别是根据研究内容，制作了局部SAH出血模型用以SAH后脑微循环障碍的研究。..3）SAH后脑微血管活性的改变.经与对照组比较，SAH后存在脑微循环障碍，且对内皮细胞依赖性血管扩张剂乙酰胆碱（Acetylcholine，Ach）与平滑肌细胞依懒性血管扩张剂SNAP（S-nitroso-N-acetyl-penicillamine）的反应均比对照组下降，对Ach的反应下降更多，提示内皮细胞功能障碍是造成脑微循环障碍的主要原因。..4）NADPH氧化酶来源的活性氧族（reactive oxygen species，ROS）在SAH后脑微血管功能障碍中的作用.SAH后脑微血管周围有明显的ROS积聚，但使用ROS清除剂MnTBAP及NADPH抑制剂apocynin及NOX-2转基因后脑微血管功能障碍未见明显好转。