通过干扰核盘菌重要功能基因提高油菜对菌核病的抗性

利用核盘菌基因组DNA为模板扩增一批核盘菌重要功能基因片段并构建发夹 (hairpin) 载体引入油菜，使其在油菜细胞中转录表达核盘菌基因的发夹RNA(hpRNA)。核盘菌浸染油菜时，hpRNA降解以后产生的siRNA等RNA干扰信号就会进入核盘菌细胞中，激发核盘菌细胞启动RNA干扰程序，将核盘菌内源相关基因的mRNA降解从而抑制该基因的表达。除了对核盘菌单个基因进行干扰之外，还将进行油菜不同转基因品系进行杂交使得多个核盘菌基因同时被干扰，从而获得油菜对菌核菌的抗性。该研究对于提高油菜对菌核病的抗性，维持我国油菜可持续发展，具有重要的理论意义和实际应用价值。

利用核盘菌基因组DNA为模板，克隆了9个核盘菌重要基因片段，其中Pac1基因、exopolygalacturonase gene、endopolygalacturonase-pg5 gene 、chitin synthase gene、cAMP-dependent protein kinase A gene、DNA-dependent RNA polymerase II gene已经构建成为hpRNA干扰载体。通过农杆菌介导已获得一批转基因再生植株。T0代转基因植株离体叶片接种鉴定结果显示，转基因植株明显增强了对菌核病的抗性。大部分转基因植株的叶片病斑的发生时间比负对照要晚24h-48h，病斑也明显小于负对照。T1代转基因植株叶片离体接种抗病鉴定结果表明，部分植株比负对照表现出更好的抗性。