P选择蛋白与树突状细胞相互作用对动脉粥样硬化进展的影响

研究发现动脉粥样硬化（AS）与炎症免疫反应有关且树突状细胞（DCs）发挥了重要作用。研究证实DCs的迁移和粘附与斑块破裂有关，而P选择蛋白也与AS发病有关。同时，DCs前体细胞- - 巨噬细胞表面存在P-选择蛋白糖配体sLeX，而且DCs细胞表面也被证实存在P-选择蛋白配体PSGL-1，但P-选择蛋白和DCs二者在AS发病中的关系尚有待证实。我们前期研究发现P选择蛋白可以诱导DCs成熟，因此推测血管内皮细胞表达的P-选择蛋白可能通过与DCs表面相应配体PSGL-1结合介导了DCs与内皮细胞的黏附，从而促进AS进展。本研究拟从细胞水平观察不同浓度P-选择蛋白对DCs分化和免疫功能成熟的影响，并在体观察P-选择蛋白缺陷小鼠、PSGL-1缺陷小鼠、ApoE/P-选择蛋白缺陷以及P-选择蛋白配体糖模拟物干预后ApoE缺陷小鼠的AS发生情况、斑块构成和DCs免疫表型和分化状态，从而确定上述假设可能。

研究发现动脉粥样硬化（AS）与炎症免疫反应有关且树突状细胞（DCs）发挥了重要作用。研究证实DCs的迁移和粘附与斑块破裂有关，而P选择蛋白也与AS发病有关。同时，DCs前体细胞- - 巨噬细胞表面存在P-选择蛋白糖配体sLeX，而且DCs细胞表面也被证实存在P-选择蛋白配体PSGL-1，但P-选择蛋白和DCs二者在AS发病中的关系尚有待证实。本研究观察P-选择蛋白（P-selectin）对树突状细胞（dentritic cells，DCs）分化和免疫功能的影响并在体观察ApoE-/-小鼠、P-/-小鼠、PSGL-1-/-小鼠的AS发生情况及斑块构成。采用人外周血经CD14+免疫磁珠法分离培养获得DCs，分为未成熟组、脂多糖组、P-selectin组、P-selectin拮抗剂组。检测各组细胞形态变化、DCs表型表达水平、免疫功能及TLR-4蛋白质和mRNA表达情况。小鼠分为8组：①ApoE-/-小鼠②ApoE/P-/-小鼠③ApoE/PSGL-1-/-小鼠④rmPSGL-1模拟物注射的ApoE-/-小鼠⑤rmPSGL-1模拟物注射的ApoE/P-/-小鼠⑥rmP-sel模拟物注射的ApoE/PSGL-1-/-小鼠⑦P-/-小鼠⑧PSGL-/-小鼠。每组小鼠均给予高脂饮食8周。观察小鼠主动脉斑块面积及斑块局部病理改变；检测外周血DCs免疫表型表达水平、主动脉斑块及内皮S-100阳性细胞数量、TLR-4蛋白及mRNA的表达。结果显示P-selectin干预后DCs具有典型树突样结构，CD1a、CD80、CD83、CD86表达明显增加，并激活初始T淋巴细胞，上调DCs内TLR-4 蛋白质和mRNA表达,而P-selectin拮抗剂可以部分抑制上述作用。与ApoE-/-小鼠相比，其余组小鼠AS早期病变均减轻，外周血DCs表型CD80、CD83、CD86及MHC-II表达下降，主动脉内膜下S-100阳性细胞数量减少，TLR-4蛋白质及mRNA表达下调（p<0.05）。通过以上研究，我们证实P选择蛋白可通过与DCs表面PSGL-1结合促进DCs成熟，激活TLR-4信号途径表达，从而发挥促动脉粥样硬化的作用。P-selectin拮抗剂可以部分抑制P-selectin介导的DCs分化成熟。