烟草花叶病毒的3’末端“复制协同脱壳”的研究

本课题用检测新生负链RNA方法研究TMV粒子的3’末端在植物细胞中脱壳机理。首先用RT/PCR方法检测到烟草原生质体在感染TMV后20分钟，病毒负链RNA已合成。用两个缺失重组病毒互补感染原生质，表明负链RNA的合成是由复制酶从TMV基因组RNA的3’末端开始合成的。根据3’末端复制协同脱壳假设，在感染细胞内应存有一种病毒复合体，其基因组RNA仅在装配区序列周围保留了外壳蛋白，5’大部分区域正在被核糖体翻译，3’末端区域正在被复制出负链RNA形成了双链结构。采用固相化抗体纯化与RT/PCR检测相结合的新技术，首次证实了在被感染烟草组织中存有这样的复合体。这些结果有力地支持了TMV3’端的脱壳是由复制酶在复制负链RNA的协同下向5’方向进行的。