TH17 相关因子参与干眼发病的机制研究

TH17细胞是近几年来新发现的一种辅助T细胞，其家族因子包括：IL-17A, IL-17F, IL-21, IL-22, CCL-20, RORγT，其诱导因子包括：IL-1β, IL-6, IL-23, TGF-β。目前初步证实干眼中IL-17A表达增高，而对其它因子研究很少。本项目通过对TH17家族因子及诱导因子在干眼患者中表达的研究，分析其与干眼分级、干眼症状、体征（TBUT、泪液分泌试验(Schirmer 1)、角膜荧光素钠染色、结膜丽丝胺绿染色）的相关性，全面系统阐明TH17各种相关因子参与干眼发病的作用机理；并建立鼠干眼模型及眼表组织、树突状细胞、CD4+T淋巴细胞共培养的模型，深入研究TH17四种诱导因子的特异性抗体在稳定角膜屏障功能，抑制活体及体外TH17细胞生成方面的作用，进一步揭示TH17诱导因子在干眼的发病、发展中的作用，为干眼的特异性治疗提供新的思路。

干眼是最常见的眼表疾病之一。干眼发病原因十分复杂，因为症状的非特异性，以及诊断方法的不稳定性，干眼目前仍缺乏一种准确性，特异性强的“金标准”。尚缺乏有效的根治方法。TH17细胞是近几年来新发现的一种辅助T细胞，其家族因子包括：IL-17A, IL-17F, IL-21, IL-22, CCL-20, RORγT，其诱导因子包括：IL-1β, IL-6, IL-23, TGF-β。目前初步证实干眼中IL-17A表达增高，而对其它因子研究很少。本项目首先在临床试验方面，对所有病例及对照组均做如下临床症状及体征检测:OSDI干眼调查问卷,TBUT,泪液分泌试验,角膜荧光素钠染色，结膜丽丝胺绿染色。并按照OSDI评分将干眼病例分为轻度组（18例18眼）和中重度组（12例12眼）。同时应用印迹细胞法收集不同程度干眼患者和正常对照组两组球结膜上皮细胞分别进行IHC法染色和real-time PCR法检测结膜细胞中TH17相关因子的基因表达，并采用luminex法对泪液中蛋白含量进行检测，发现TGF-β1，IL-1β，IL-6，IL-17A，IL-21，CCL-20这些TH17相关因子在干眼患者眼表的表达无论蛋白水平还是基因水平均明显增加，考虑可能是干眼患者发病的关键因子。统计相关性分析结果显示：IL-6，IL-17A，IL-1β，TGF-β1与干眼分级、症状、体征密切相关，为干眼的特异性诊断提供新的指标。其次通过制作干眼鼠模型并分组，用相关因子的特异性抗体注射入体内来观察不同组的干眼反应的差别，不同组鼠眼球做石蜡切片，进行IHC法染色，搜集不同组鼠结膜角膜组织real-time PCR法检测结角膜细胞中TH17相关因子的基因表达，发现TH17四种诱导因子中的IL-6，IL-1β，TGF-β1的特异性抗体可以明显降低眼表炎症反应，抑制活体TH17细胞生成。而IL-17A的特异性抗体可以明显降低干眼鼠眼表炎症反应，但对抑制活体TH17细胞生成作用不明显，考虑IL-17A并不是TH17细胞的诱导因子，而是TH17细胞分泌的最主要因子，因此考虑也是干眼发病的关键因子。综合临床及基础实验结果，发现在TH17细胞相关因子中IL-6，IL-17A，IL-1β，TGF-β1是干眼发病的关键因子，拮抗这些因子可能为干眼治疗提供新的思路。