基于“肾痿”组方的糖肾平干预糖尿病肾病肾小管上皮细胞转分化的分子机制研究

Diabetic Nephropathy is one of the prime reasons that can lead to the end-stage renal disease(ESRD) in diabetes. Epithelial mesenchymal transition(EMT) of renal tubular epithelial cells effected by advanced glycation end products(AGEs) or other factors, this is maybe the crucial mechanism for renal tubule interstitial fibrosis(TIF),and the main pathological change is the TIF in DN, which can result in ESRD. With the National Natural Science Foundation, we have done the research on the pathogenesis of podocytes apoptosis and the interference system by Tang Shen Ping capsules. Inflammatory cell infiltration in renal interstitium, vacuole-like changes in renal tubular epithelial cell and TIF etc., can be observed in DN rats in the previous research. This condition can be significantly relieved by intervention of Tang Shen Ping capsules, however, the specific mechanism is unclear now. Whether or not renal tubular epithelial-mesenchymal transition(EMT) in DN rats is related to intervention of Tang Shen Ping capsules needs further research.The following topic research attempts to study EMT in DN as a key point, based on the animal and cell models of diabetes mellitus, using molecular biological methods like western blot, RT-PCR, etc. From the whole animal model and cell culture, we try to do the research on the protein and gene level, systematicly study the interference mechanism on Tang Shen Ping capsules acting on EMT on different levels and multiple target points. To expand the application of "ConsumptiveRenal Disease Hypothesis" theory, and to develop the basic theories of Chinese Medicine.

糖尿病肾病（DN）是糖尿病导致终末期肾病（ESRD）的主要原因之一。在DN糖基化终末产物等因素作用下，肾小管上皮细胞（TEC）发生EMT，可能是导致肾小管间质纤维化（TIF）的重要机制，而TIF是DN发展到ESRD的最主要的病理改变。我们在前一项国家自然基金资助下，研究了DN足细胞凋亡的发病机制及糖肾平干预机制。前期研究发现DN大鼠肾间质内大量炎性细胞浸润，TEC空泡样变及TIF等，而糖肾平干预后以上病理变化明显改善，但具体作用机制不明。这是否与糖肾平干预TEC的EMT有关，有待进一步研究。本课题试图以DN肾小管上皮细胞EMT为切入点，在建立DN动物模型和EMT细胞模型的基础上，采用免疫印迹、实时定量PCR等分子生物学方法，从整体动物、细胞培养，蛋白质、基因水平以及信号转导进行多层次、多靶点研究，系统研究糖肾平干预TEC的EMT介导的TIF机制，拓展"肾痿"假说的应用，发展中医药基础理论。

糖尿病肾病（DN）是糖尿病（DM）的常见和严重并发症之一，也是导致终末期肾病（ESRD）的主要原因之一。肾小管上皮细胞（TEC）在DN糖基化终末产物等因素作用下，导致肾小管病变及肾小管间质纤维化(TIF)，肾小管上皮细胞EMT可能是受损肾脏产生肌成纤维细胞的关键，是导致TIF发生的最重要的机制之一，TIF是DN发展到ESRD的最主要的病理改变。我们前期工作发现DN大鼠大量蛋白尿、肾小管间质内大量炎性细胞浸润，肾小管上皮细胞空泡样变及TIF等现象。为了阐释这些现象，课题组在4年的时间里，从整体动物和体外细胞培养两个方面，用免疫组化、原位杂交、Western blot、MTT、实时定量PCR等分子生物学技术，从EMT信号转导途径方面研究糖肾平干预肾小管上皮细胞EMT及TIF的作用机制。在此过程中，我们将“肾痿”假说进一步的充实与完善，发展为“肾痿”学说。.动物实验：成功建立诱导建立了2型糖尿病KKAy小鼠模型，开展了相关研究，应用光学显微镜和透射电镜观察KKAy小鼠肾脏病理学的一般和超微结构；应用免疫组化和原位杂交方法，检测了糖肾平对KKAy小鼠肾组织TGF-β1、E-cadherin、α-SMA、RhoA、ROCK1、smad6、BMP7、Jagged1、Notch1、hes1、snail1蛋白以及mRNA基因表达的影响。细胞培养实验：MTT检测肾小管上皮细胞增殖与活力；Western blot以及实时定量PCR检测肾小管上皮细胞细胞TGF-β1、E-cadherin、α-SMA、RhoA、ROCK1、Jagged1、Notch1、hes1、snail1蛋白以及mRNA基因的表达。.近4年来，课题组在国内核心期刊上发表论文11篇，SCI论文1篇，各类会议论文42篇，其中大会报告4篇；课题组共有2人1次出席国际学术会议，12人25次参加国内学术会议并进行学术交流。.在课题研究过程中，课题组不断发现有学术价值的新的科学问题，非常有必要进一步开展更深入的研究，比如肾小管上皮细胞转分化与自噬。同时，糖尿病肾病的病因及病机相当复杂，许多未知领域有待探索。在基金课题的研究过程中，我们与国内、外学者开展了广泛的交流和合作，期望在更高的层面开展国际间重大课题的合作研究，在经费方面希望基金委继续给予支持。