JNK/c-Jun信号通路对非酒精性脂肪肝炎Fas介导肝细胞脂性凋亡的影响及解毒化痰法的干预作用

Lipoapoptosis is an important pathological feature of NASH, and the mechanism of apoptosis involves Fas expression. In recent discoveries, JNK signaling pathway is involved in cell apoptosis by factor, stress, drugs-induced. In the pathological processes of NASH, FFA and ROS can activate JNK signaling pathway. Therefore, Combined with previous studies, our group establishes the working hypothesis of “JNK signaling pathway mediated hepatocyte apoptosis by activating downstream of Fas/FasL system”, establishing respectively cell models and rat models of NASH, and assays the expression of p-JNK, p-c-Jun, Fas, FasL, Caspaes-8 mRNA and protein in NASH model by immunohistochemistry, real-time quantitative PCR and Western-blot method. And we further observe interaction between JNK signaling pathway and Fas/FasL system by correlation analysis. At the same time, based on the Chinese medicine “phlegm turbid/lipotoxicity” theory, we conduct intervention with the Traditional Chinese Medicine “arrowhead Cellulite pill” of “detoxify phlegm law” as a guide. We look forward to reveal the molecular mechanism of hepatocytes lipoapoptosis from JNK stress signaling pathway and the intervention mechanism of “detoxify phlegm law” on it, and provide new targets and theoretical support for Traditional Chinese Medicine treatment of NASH.

脂毒性凋亡是NASH的重要病理特征，其凋亡机制与Fas有关。近年来发现，JNK信号通路参与细胞因子、应激、药物等诱导的细胞凋亡。在NASH病理过程中，FFA及其氧化应激产物（ROS）可导致JNK信号通路激活。因此，结合前期研究工作，本课题组建立“JNK信号通路通过激活下游的Fas/FasL系统介导肝细胞脂性凋亡”的工作假说，分别建立NASH大鼠模型和细胞模型，采用免疫组化法、实时荧光定量PCR法、Western-blot法检测模型中p-JNK、p-c-Jun、Fas、FasL、Caspaes-8 mRNA和蛋白表达，并通过相关性分析，进一步观察JNK信号通路与Fas/FasL系统的相互作用。同时依据中医“痰浊/脂毒”理论，应用以解毒化痰法为指导的“慈菇消脂丸”进行干预，拟从JNK信号通路揭示肝细胞脂性凋亡的分子机制及解毒化痰法对其干预的作用机制，为中医药治疗NASH提供新的靶点和理论支撑。

脂毒性凋亡是非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的重要病理特征，本课题从脂肪酸及其氧化应激产物（ROS）导致肝细胞脂性凋亡入手，结合前期研究工作，建立“JNK信号通路通过激活下游的Fas/FasL系统介导肝细胞脂性凋亡”的工作假说，分别建立NASH大鼠模型和细胞模型，采用 TUNEL法检测肝细胞凋亡；HE染色、红油O染色观测肝组织脂肪变性、炎症反应；生化学方法检测与脂代谢、炎症反应、氧化应激有关的指标；采用免疫组化法、实时荧光定量PCR法、Western-blot法检测模型中p-JNK、p-c-Jun、Fas、FasL、Caspaes-8 mRNA和蛋白表达，并通过相关性分析，进一步观察JNK信号通路与Fas/FasL系统的相互作用。同时依据中医“痰浊/脂毒”理论，应用以解毒化痰法为指导的“慈菇消脂丸”进行干预，拟从JNK信号通路揭示肝细胞脂性凋亡的分子机制及解毒化痰法对其干预的作用机制，为中医药治疗NASH提供新的靶点和理论支撑。项目研究始终按照计划开展工作，完成了全部研究任务，实现了预期研究成果。本项目研究已经取得一定影响的成果，项目研究成果在国内期刊共发表学术论文 7 篇，其中 CSCD 目录期刊发表论文 2 篇，省级期刊 5 篇。参加国家级学术会议4次。慈菇消脂原始处方申请国家专利1项（实审阶段待答辩）。项目实施中培养硕士研究生2名。.本研究运用解毒化痰为治法的慈菇消脂丸以化痰解毒、消降浊脂，从整体—细胞—分子水平揭示中医药干预JNK/SAPKs应激信号通路和Fas/FasL系统在NASH介导的细胞凋亡。通过对慈菇消脂丸干预JNK/SAPKs应激信号通路和Fas/FasL系统诱导NASH脂毒性凋亡的基础研究，为进一步揭示以解毒化痰法为指导的慈菇消脂丸治疗NASH的作用机制，充分发挥中医药的优势和特色，寻找确切的中医药复方治疗NASH的作用药物靶点和机制提供理论依据，亦为应用中医药防治NASH提供有效方法，阐明以解毒化痰法为治则的中药制剂“慈菇消脂丸”防治NASH的作用机制的科学意义，为减少肝脏脂肪病变及临床应用推广提供理论支撑。