复方杠柳对HPV E7基因相关尖锐湿疣复发环节的干预作用及机理研究

尖锐湿疣(CA)极易复发，并且HPV感染是宫颈癌恶变的首要因素。HPV E7癌基因与CA复发及恶性变密切相关，机理在于E7不仅能使表皮细胞保持HPV DNA复制的能力（潜伏感染），还作用于Rb、E2F基因促进细胞增殖，并影响LC功能导致皮肤局部免疫缺陷。复方杠柳是名老中医许铣参考民间验方创制，是经20年临床实践形成的外用防治CA复发的有效方药。本研究将HPV16相关SiHa细胞系体外培养和表皮郎格罕细胞局部免疫功能研究有机结合，采用Northern印迹杂交、流式细胞术、ELISA、免疫细胞化学等技术，从HPV E7表达及其相关的表皮细胞增殖和皮肤局部细胞免疫缺陷这三个复发环节，探讨复方杠柳外用控制CA复发的作用机制。复方杠柳控制CA复发，是对传统中药的挖掘、提高和验证,丰富了中医外治疗法。本课题探求复方杠柳控制CA复发的作用特点和分子机制，提出了中医药控制CA复发机理研究的新途径、新方法。

尖锐湿疣（Condyloma acuminatum,CA）是人类乳头瘤病毒（Human papilloma virus,HPV）感染所致，极易复发， HPV感染还是宫颈癌恶变的首要因素。HPV E7癌基因与CA的复发及恶性病变密切相关，可使表皮细胞保持HPV DNA复制的能力；视网膜母细胞瘤（Rb）蛋白是生长抑制蛋白，与核转录因子E2F形成复合物，抑制E2F对靶基因的转录,从而抑制细胞增殖，而E7基因竞争性的与Rb结合，导致细胞周期调控失控。复方杠柳是参考民间验方创制，是经20年临床实践形成的外用防治CA复发的有效方药。. 本研究采用MTT法，检测复方杠柳对SiHa细胞增殖的影响；通过RT-PCR和Western Blot方法，检测复方杠柳对SiHa细胞HPV E7基因表达的影响，以及对SiHa细胞Rb、E2F表达和功能的影响；采用流式细胞术检测复方杠柳对SiHa细胞周期和增殖的影响，探讨了复方杠柳对HPV的作用及其对CA细胞增殖的作用机理。实验结果显示，在复方杠柳的作用下，对SiHa细胞生长的抑制和诱导细胞凋亡作用均有明显剂量依赖性；能下调HPV E7基因的表达量，使HPV DNA复制能力减弱，产生抗HPV的作用；能使Rb基因的表达量升高，E2F蛋白含量降低；流式细胞术检测显示复方杠柳对细胞周期有明显的调控作用，细胞周期的G1期细胞峰值显著降低，细胞大量坏死，能有效抑制CA细胞的增殖。. 本研究表明，复方杠柳控制CA复发，其机理在于抑制HPV E7基因这一关键环节，调控E7基因相关Rb-E2F蛋白复合物。本课题探求了复方杠柳控制CA复发的作用特点和分子机制，提出了中医药控制CA复发机理研究的新途径、新方法。