病毒性心肌炎B细胞miRNA-185/EphB2介导心肌纤维化的机制研究

Although T cell-mediated inflammations play the important role in the pathogenesis of viral myocarditis (VMC), B cell infiltration was also observed in the lesions of VMC. Recently,we found that B cells contributed to the myocardial fibrosis of VMC by secreting TNF-α, but the mechasim of which remains unclear. EphB2 is the main member of tyrosine protein kinase family,and it is usually expressed on some high proliferative cells like tumor cells. Lately, our research discovered that EphB2 were highly expressed on B cells from patients with dilated cardiomyopathy (DCM) secondary to VMC,and its expression could be regulated by miRNA-185. According to the fact that EphrinB2,the dominant ligand of EphB2, is highly expressed on cardiac fibroblasts,this study was to explore the mechanism of B cell miRNA-185/EphB2 acting in the myocardial fibrosis of VMC by establishing VMC mouse model induced with CVB3, transfecting the miRNA-185 oligonucleotides or siRNA into B cells or VMC mice respectively, measuring the B cell EphB2 expression, anti-heart antibodies and TNF-αsecretion, B cell proliferation, myocardial fibrosis, and investigating the interaction between B cell EphB2 and cardiac fibroblast EphrinB2. The data would provide an new immune mechanism for the pathogenesis of VMC.

病毒性心肌炎（VMC）发病中虽然T细胞介导炎症反应发挥重要作用，但是B细胞也浸润心肌。最近我们发现B细胞能通过分泌TNF-α参与VMC心肌纤维化进程，然而B细胞介导VMC心肌纤维化机制尚未阐明。EphB2是酪氨酸蛋白激酶家族主要成员，通常表达于肿瘤等高增殖性细胞。我们新近研究发现，EphB2在慢性VMC患者B细胞上高表达，其表达受miRNA-185调控；而EphB2的优势配体EphrinB2在心肌成纤维细胞表面高表达。本研究拟建立柯萨奇B3病毒诱导的VMC小鼠模型，利用转染技术分别导入miRNA-185寡核苷酸和miRNA-185siRNA，通过检测B细胞EphB2表达、抗体分泌、增殖和TNF-α分泌、心肌纤维化等变化，以及B细胞EphB2与成纤维细胞EphrinB2分子间的相互作用，探讨B细胞miRNA-185/EphB2对VMC心肌纤维化的作用机制，从而揭示VMC新的免疫学发病机理。

近年研究发现B细胞与病毒性心肌炎（VMC）心肌纤维化有紧密联系，然而其中的作用机制尚未阐明。本研究在B细胞EphB2的配体EphrinB2高表达于心肌成纤维细胞的研究基础上，拟应用转染技术，探索B细胞miRNA-185/EphB2对VMC心肌炎症和纤维化的调控作用，揭示VMC新的免疫学发病机制。.我们首先利用电转染技术向分离的VMC小鼠B细胞中导入miRNA-185寡核苷酸和miRNA-185siRNA，研究体外B细胞过表达或基因沉默抑制miRNA-185表达对B细胞EphB2基因和蛋白水平变化、以及B细胞功能（抗体产生，增殖和TNF-α分泌）的影响，结果发现miRNA-185负调控VMC小鼠B细胞EphB2表达和功能；EphB2具有促进心肌纤维化作用。. 为进一步验证miRNA-185和B细胞对心肌纤维化的调控作用，我们增加了miRNA-185和B细胞的临床研究。经过一年随访，结果发现miRNA-185通过负调控B细胞分泌TNF-α和抗心肌β1-AR抗体的功能、与扩张型心肌病（DCM）患者死亡预后负相关，为本研究提供了重要的临床证据和应用价值。.在分子机制研究中，我们发现Ephb2不仅表达于B细胞，它也广泛表达于心肌成纤维细胞，并通过TGF-β/SMAD3/GSK-3β通路，调节心肌成纤维细胞的分化、增殖及胶原分泌，促进心肌纤维化进程。. 在经典的T细胞炎症学说解释VMC发病机制的背景下，我们首次发现B细胞miRNA-185/EphB2介导VMC心肌纤维化，揭示了VMC发生发展的新的免疫学机制，为临床防治VMC提供了新的靶点和实验依据。 . 在项目研究开展过程中，我们发表了4篇高水平SCI文章，共培养了博士3名、硕士3名。我们对于B细胞和VMC心肌纤维化新机制的研究，不仅为后续VMC向DCM演变研究和早期干预提供了新思路，而且有助于提升对B细胞功能的认识、以及其他脏器纤维化研究的扩展。