新型肝源纯化的干细胞群（NG2+/VPLSC）诱导肝纤维化逆转的实验研究及其分子机制探讨

肝纤维化(HF)、肝硬化是严重威胁人类健康的疾病之一，其防治仍是当今尚未攻破的难题。肝移植难以推广，肝外来源的肝干细胞距离临床应用差距较大。探讨一种新的肝细胞的修复治疗方法，对其防治的研究具有重要意义。探索在HF中是否存在肝干细胞生物学特性的细胞群，能否在体外和体内可被诱导分化为功能性的肝细胞，必将是新的研究热点。课题组前期实验证明肝脏中存在着一类尚未开发的肝干细胞群即NG2+/VPLSC。本项目拟从纤维化组织中开发肝干细胞（"废品利用"）而诱导分化功能性肝细胞的角度探讨肝再生及分子生物学机制。对NG2+/VPLSC进行体外生物学活性鉴定、体内损伤修复作用及分子调控机制的研究。本研究项目对治疗HF和防止HC发生，具有重要的理论意义和实际临床应用价值。

该项目提出的科学假设是目前学术界尚未解决的问题，已按原计划基本完成。在进行本项目研究过程中，项目负责人密切关注成体肝源性干细胞研究的前沿领域，取得了重要进展。目前学术界对成体肝源性干细胞研究面临4个问题：1）何种方法可以从肝脏组织中分离出成体干细胞；2）干细胞和肝脏干细胞特性鉴定以及去别与学术界认可的肝脏卵圆细胞和间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)；3）治疗终末期肝脏潜力和相应调控通路以及临床应用可行性。.本项目首次采用独创方法（“Percoll-Plate-Wait procedure”）（发明专利：201210426637.8,终审中，见研究成果表分类1）成功从成年小鼠（C57BL/6）肝脏汇管区血管周围分离纯化了表达神-胶质抗原1（neuro-glial agtigen 2, NG2）细胞群，命名为MLpvNG2+cells. 在此基础上证明了MLpvNG2+cells具有常规干细胞和肝脏干细胞特性（已修稿）。结合我们首次采用二乙基亚硝（Diethylnitrosamine,DEN)在C57BL/6小鼠诱导的肝纤维化/肝硬化模型(2015,通讯作者，见研究成果表分类2)进行体内评价。MLpvNG2+cells治疗后效果良好，肝脏F4/80阳性Kupffer 细胞和a-SMA阳性星型细胞明显减少。重要的是，MLpvNG2+cells在肝硬化环境中可分化为大量成熟肝细胞，HGF/cMet信号通路可能参与MLpvNG2+cells在肝硬化环境中成熟肝细胞分化。另外，在少量其它相关研究中我们有意外发现。例如我们发现，MLpvNG2+cells不仅存在于成年小鼠肝脏中，而且还存在于其它器官如胰腺、心脏、肾脏、肺脏、皮肤、骨髓及眼结膜中（2014 通讯作者，见研究成果表分类4）。又例如我们发现，表达NG2细胞在人类肝癌（2015,通讯作者，见研究成果表）和胰腺癌（2015,通讯作者，见研究成果表）中表达增高，提示NG2阳性细胞很可能是肿瘤（肝癌、胰腺癌）干细胞新型标记分子，需做进一步研究。本课题的研究提示，MLpvNG2+cells可能是一群应急的、不同于肝脏卵圆细胞、不同于MSCs、具有免疫耐受的一群新型肝源性干细胞群。为终末期肝病治疗提供了新的干细胞群。