lncRNA-M057265下调Fundc1的分子机制及其在创伤性脊髓损伤后神经元线粒体自噬中的作用

Spinal cord injury (SCI) is damage to any part of the spinal cord or nerves at the end of the spinal, often causes permanent changes in strength, sensation and other body functions below the site of the injury. We try to find the pathophysiologic process of secondary injury of SCI. The recent study show that, the Fundc1 gene is a important receptor molecules of mitophagy. in my study, we found lncRNA-M057265 up-regulated expression after SCI, and we use PCR test lncRNA-M057265 down-regulation Fundc1 gene. We try to verify the mechanism of high expression of lncRNA-M057265 downgraded Fundc1 inhibit mitophagy after spinal cord injury, is the reason of neuron apoptosis. We use RNA interfere, Realtime PCR，Western Blot，RIP-RT-PCR，Chirp-Seq，ChIP-qPCR test and use the two-photon microscope, transmission electron microscopy observe the autophagosome and apoptosis body.

脊髓损伤发病率致残率高，已成为严重的社会问题。Fundc1是参与线粒体自噬的重要受体分子，损伤后神经元细胞线粒体保护性自噬有利于抑制凋亡，保护神经元。前期我们通过测序发现lncRNA-M057265在脊髓损伤急性期内的表达上调而Fundc1明显降低，在神经元细胞中过表达lncRNA-M057265后证实二者存在负性关系，同时发现lncRNA-M057265能够与EZH2蛋白结合。为进一步验证损伤急性期内lncRNA-M057265的高表达下调Fundc1进而抑制线粒体自噬并导致神经元凋亡这一通路，我们采用RNAi，qPCR，WB，RIP-RT-PCR，Chirp-Seq，ChIP-qPCR等方法技术解析lncRNA-M057265如何通过EZH2蛋白抑制Fundc1基因表达，最终为脊髓损伤急性期内受损神经元线粒体自噬和凋亡水平改变提供新的理论解释，为临床提供新的治疗靶点。

创伤性脊髓损伤（TSCI）发病急、病情严重，损伤后神经功能预后差，45%患者遗留肢体瘫痪，严重影响生活质量，给整个社会、家庭和个人带来沉重的经济和心理负担，且发病率随着我国经济发展呈上升趋势。. 本项目研究了TSCI后高表达的lncRNA-M057265（小鼠）和lncRNA-H0514842（人）通过下调Fundc1的表达抑制神经元保护性自噬，导致损伤后神经元凋亡的机制。取得以下结果：.1. 人和小鼠Fundc1启动子区存在H3K27me3位点甲基化，且EZH2蛋白直接或间接与启动子区结合，lncRNA-H0514842和lncRNA-M057265能促进Fundc1启动子区甲基化水平。.2. lncRNA-H0514842和lncRNA-M05726能明显抑制Fundc1的mRNA和蛋白表达，并能显著抑制神经元细胞保护性自噬。.3. lncRNA-H0514842能明显抑制Fundc1的mRNA和蛋白表达，并能显著抑制神经元细胞自噬。.4. lncRNA-H0514842和lncRNA-M05726能促进神经元细胞凋亡。. lncRNA是近年研究广泛的非编码RNA，参与了多种生命进程的调节，在TSCI中，其作用尚未被深刻的揭示。我们的研究揭示了TSCI后，lncRNA异常高表达，抑制了神经元细胞的保护性自噬，进而促进了受损神经元的凋亡，最终导致患者的不良预后。深入研究TSCI的发病机制，及lncRNA在其中的重要作用，对改进临床治疗策略和寻找有效的治疗靶点有积极意义。