风湿性心脏病发生发展过程中关键蛋白质分子的筛选与功能分析

Rheumatic heart disease is one of the symptoms of heart disease in our country, especially in guangxi region. whether there are different protein occurred during the process of the development of Rheumatic heart disease, is not yet reported. This project use different degree of rats mitral ale tissue in the progress of rheumatic heart disease as the research object, by normal rats mitral ale tissue as controls, using quantitative proteomics technology iTRAQ to construct the protein expression spectrum of different stages of rheumatic heart diseasee, screening and confirm the relevant protein of rheumatic heart disease. Then using bioinformatic approaches to analytical differentially expressed molecular associated with the disease.The project is to use the different stages in the occurrence and development of rheumatic heart disease as the breakthrough point, which aims at revealing the rheumatic heart disease occurred in the process of development of the differences of the molecular basis.It may provides new theoretical basis to the pathogenesis of rheumatic heart disease research.

风湿性心脏病是我国，特别是广西地区常见的心脏病之一。风湿性心脏病发生发展过程中是否存在不同的差异蛋白，目前尚未见报道。本项目拟采用大鼠风湿性心脏病进展不同程度的二尖瓣瓣膜组织为研究对象，以正常大鼠二尖瓣瓣膜组织为对照，运用定量蛋白质组学iTRAQ技术构建风湿性心脏病不同进展阶段的差异蛋白表达谱，筛选并验证与大鼠风湿性心脏病发生发展相关的差异分子；并通过生物信息学方法解析差异表达分子与疾病的联系。本项目以风湿性心脏病发生发展的不同阶段为切入点，旨在揭示风湿性心脏病发生发展过程中差异蛋白的分子基础，为风湿性心脏病的发病机制研究提供新的理论依据。

风湿性心脏病是我国尤其是广西地区常见的心脏病之一，风湿性心脏病的蛋白组学目前较少报道。本研究通过采用风湿性心脏病进展不同程度的大鼠二尖瓣瓣膜组织为研究对象，以正常大鼠二尖瓣瓣膜组织为对照，运用定量蛋白质组学 iTRAQ 技术构建风湿性心脏病不同进展阶段的差异蛋白表达谱，筛选出与大鼠风湿性心脏病发生发展相关的差异蛋白，利用免疫印迹、免疫组化及液态蛋白芯片技术进行验证，利用siRNA转染技术初步分析关键分子的功能，并通过生物信息学分析，揭示差异蛋白与疾病的联系及其潜在的诊断治疗作用。本研究共分析出急性期差异蛋白共295个（差异倍数＞1.2），其中176个表达上调，119个表达下调；慢性期差异蛋白345个（差异倍数＞1.2），其中174个表达上调，171个表达下调。其中，验证表达上调蛋白（alpha-SMA、COL18A1、periostin、GAPDH、CD9）的结果与iTRAQ质谱分析结果一致。沉默瓣膜间质细胞alpha-SMA的表达，发现细胞增殖、粘附能力减弱。此外，我们研究了风湿性心脏病大鼠及患者心脏组织和血清中Th17 细胞及其效应因子的表达变化，发现IL-17和IL-6在风湿性心脏病大鼠心脏组织和血清中表达上调，IL-17、IL-21、IL-6和IL-23在风湿性心脏病患者二尖瓣组织中表达上调。利用IL-17A细胞因子干预瓣膜间质细胞，发现瓣膜间质细胞茜素红染色钙结节增多；而IL-17A单克隆抗体阻断后钙结节减少。本研究通过构建风湿性心脏病不同进展阶段的差异蛋白表达谱，为进一步深入探讨差异蛋白、粘着斑连接通路、白细胞穿透内皮迁移通路及上皮/内皮间质转化在RHD发生发展中的作用提供基础。同时，Th17 细胞及其效应因子在风湿性心脏病中的表达变化可能作为早期诊断RHD的手段，IL-17A拮抗剂或许成为一种干预风湿性心脏病进展的新方法。