基于自噬网络调控系统探讨电针神庭、百会改善大鼠脑缺血再灌注后认知障碍的作用机制

Finding out a simple and effective treatment for cognitive impairment after stroke is an important problem for the researchers of rehabilitation medicine.It has been confirmed in clinical practice and preliminary experimental studies that electroacupuncture of Shenting(DU24) and Baihui(DU20) can improve cognitive impairment, while its action mechanism is still not clear. Many preliminary experimental studies initially show that neural cell autophagy network control system plays an important role in the formation and development of cognitive impairment. Therefore, we hypothesized that through regulating neural cell autophagy network control system may be one of the mechanisms that electroacupuncture at Shenting(DU24) and Baihui(DU20) improve cognitive impairment after stroke. This study will explore the mechanism of electroacupuncture at Shenting(DU24) and Baihui(DU20) for cognitive impairment in a rat model of cognitive impairment produced by left middle cerebral artery occlusion, using the Morris water maze and step down test to evaluate the influence of learning and memory ability of rats from behavior , and adopting the TTC/MDC staining to evaluate the infarct scope and autophagosome quantity in brain tissue, adopting the transmission electron Western Blot, Bio-Plex Suspension Array System, and immunofluorescence staining techniques based on neural cell autophagy network control system to clarify the possible molecular mechanism of electroacupuncture at Shenting (DU24) and Baihui (DU20) for cognitive impairment.

寻找简便、有效的治疗脑卒中后认知障碍的手段是摆在康复医学研究者面前的重要问题。临床实践和基础研究已证实电针“神庭”、“百会”可以改善脑卒中后认知障碍，但其作用机制尚不清楚。基础研究发现自噬网络调控系统在脑卒中后认知障碍的形成和发展中扮演着重要角色，本研究从自噬网络系统的调控为切入点，研究电针“神庭”、“百会”是否通过调控自噬网络系统来改善脑卒中后认知功能。首先通过左侧大脑中动脉线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注后认知障碍动物模型(MCAO)，以电针干预，采用Morris水迷宫、跳台实验从行为学评价电针对模型动物学习、记忆能力的影响；采用TTC/MDC染色评测电针对大鼠脑梗塞范围、脑组织中自噬小体形成的影响；其次采用透射电镜、蛋白质印记法、悬液芯片系统、免疫荧光染色等技术证明对自噬网络系统的调控是电针“神庭”、“百会”治疗脑卒中后认知障碍的可能的分子生物学机制。

近年来，随着社会、经济的迅速发展，脑卒中的发病率愈来愈高，且呈年轻化趋势。而认知障碍是脑卒中最常见的并发症之一，严重影响了运动和感觉功能等的康复，对患者的日常生活活动能力及生活质量亦产生直接影响。学习记忆功能障碍是导致脑卒中患者认知障碍的主要原因。临床实践和基础研究已证实电针神庭、百会可以改善脑卒中后认知障碍，但其作用机制尚不清楚。. 本研究从自噬网络系统的调控为切入点，通过左侧大脑中动脉线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注后认知障碍动物模型(MCAO)，以电针神庭、百会干预，采用Morris水迷宫、跳台实验从行为学评价电针对模型动物学习、记忆能力的影响；采用TTC/MDC染色评测电针对大鼠脑梗塞范围、脑组织中自噬小体形成的影响；其次采用透射电镜、蛋白质印记法、免疫荧光染色等技术证明对自噬网络系统的调控是电针“神庭”、“百会”治疗脑卒中后认知障碍的可能的分子生物学机制。实验结果显示：电针神庭、百会穴可减少局灶性脑缺血再灌注认知障碍模型大鼠脑梗死体积，改善大鼠学习、记忆能力，提高海马部位LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、PI3K、AKT、Beclin-1基因及蛋白表达水平，证实了电针神庭、百会可通过诱导脑缺血再灌注大鼠梗死灶皮质及海马部位自噬的表达，保护神经细胞，揭示了电针神庭、百会改善脑卒中后认知障碍的作用机制，丰富了电针治疗脑卒中后认知障碍的理论基础，为针刺同类机制研究提供了方法学借鉴，具有极其重要的意义。