基于高效液相色谱-在线生物化学检测技术的治疗老年痴呆疾病中药药效成分的高通量筛选与评价

This study will set up the techniques of online HPLC-biochemistry detection to quick and sensitive screen effective ingredients in traditional Chinese medicines (TCMs), such as HPLC-DAD-UV, HPLC-DAD-MS and HPLC-DAD-FL-MS, based on a combination of analytical chemistry, biochemistry and traditional pharmacy. The active compounds in Danshen, Ginkgo biloba leaves and Puerariae Lobatae will be quickly screened through the studies of their chromatographic fingerprints combining different online techniques for the evaluation of their inhibiting acetylchlinesterase. The characteristics of different active components in the treatment of Alzheimer′s Disease were synthetically analyzed through combining their antioxidant activity fingerprints. This will provide a basis and analysis method for the traditional treatment of Alzheimer′s Disease and the quick convenient search of acetylchlinesterase inhibitors in TCMs, and give a convenient tool and way for the separate and screen effectively single compound and constituent groups. A further exploration of the new model quality evaluation of TCMs will be developed based on the combination of chromatographic fingerprints, activities and relative disease to monitor the active ingredient / pharmacodynamic characteristic fingerprints. These online techniques will support a screening platform for the effective compounds in TCMs based on other enzymes/receptors.

本课题基于分析化学、生物化学、中药学多学科相结合拟建立高效液相色谱-生物化学检测快速、灵敏地筛选中药药效物质基础的在线分析技术，例如HPLC-DAD-UV、HPLC-DAD-MS和HPLC-DAD-FL-MS。通过对丹参、银杏叶、葛根药材的色谱指纹图谱的研究结合不同的在线乙酰胆碱酯酶抑制活性检测方法，快速筛选三种药材中的药效成分，并结合前期研究的三种药材抗氧化活性特征谱综合分析不同药效成分在老年性痴呆疾病治疗过程中的作用特点。为老年性痴呆疾病的中药治疗及中药中乙酰胆碱酯酶抑制剂的快速发现提供研究基础和分析技术，为有效地、有目的地筛查和分离中药中活性单体和药效组分提供一种便捷的手段和方法。并进一步探索基于色谱指纹、活性特征及相应病症相结合以监测活性成分/药效组分特征指纹的中药质量评价模式，建立的在线分析技术将为其它酶/受体及相对应病症的中药药效成分的快速筛选提供技术平台。

中药是一个多成分、多靶点的复杂体系，其有效性与安全性评价还有许多未能解决的问题，主要不足之处在于不能快速确定化学成分的生物活性，导致难以对中药的药效物质进行监控。而传统的化学成分分离模式存在花费高、耗时长、工作量大、药效成分易丢失、分离的化合物没有意义等缺陷，难以适应现代化工业发展对于现代分析方法快速、灵敏、操作简便的要求。因此，发展一种更有效的中药有效成分的快速筛选方法尤为必要。. 课题研究建立了高效液相色谱分离-生物化学检测（HPLC-DAD-BCD）在线分析技术，包括HPLC-DAD-DPPH/ABTS、HPLC-DAD-FL-AchE、HPLC-DAD-AchE。采用阳性对照药加兰他敏和石杉碱甲对在线分析方法进行了方法学考察。运用在线分析技术对丹参注射液、葛根、银杏叶提取物、黄柏、黄连等药材及制剂中治疗老年痴呆疾病靶点的乙酰胆碱酯酶（AchE）抑制剂和抗氧化成分进行快速筛查。采用HPLC-FTMS方法对活性成分进行了结构鉴定。建立了12批次不同品牌茶叶中的α-葡萄糖苷酶抑制剂的在线分析方法，采用96孔板离线方法对在线分析方法筛选出的活性和非活性成分（对照品）进行确证，两种方法测定结果一致。. 通过对不同中药活性成分的研究及方法学考察，结果表明课题建立的HPLC-DAD-BCD在线分析方法的稳定性、重现性良好，能够准确、快速筛选中药中与疾病治疗关联的酶抑制剂。课题建立的分析方法获得了2项省级科研项目资助，发表了2篇SCI论文、1篇核心期刊论文，1篇论文获得中国药学会暨第十七届中国药师周大会二等奖，培养了2名硕士研究生，1名研究生撰写的项目获得中央高校基金资助。其它4篇论文正在发表中。已达到课题的研究目标。. 课题研究将分析化学、中药学、生物化学不同领域相结合，发展了多种HPLC-DAD-BCD在线分析技术，为解决中药领域中如何快速确定活性成分的疑难问题和有效、有目地指导活性成分的大量分离提供了研究方法和技术手段。这种多领域结合能够拓宽目前分析仪器的应用领域，为当前色谱分析技术的发展和新仪器的开发提供了新的研究思路和基础。