鲤春病毒血症病毒糖蛋白抗原表位定位研究

鲤春病毒血症是由鲤春病毒血症病毒(SVCV)感染引起的鲤鱼的一种重要病毒病，SVCV糖蛋白位于病毒表面,是介导病毒内吞作用的主要成分，也是病毒最重要的中和抗原。由于鲤春病毒血症病毒在体外需要较低温度、在特殊细胞系上增殖，较难培养，为了得到可以大量制备、并具有良好免疫功能的免疫用抗原，申请者首次筛选鲤春病毒血症病毒糖蛋白中和线性抗原表位，精准确定决定有效免疫保护功能的氨基酸序列。本研究拟首先利用真核表达系统表达鲤春病毒血症病毒糖蛋白，利用该糖蛋白制备单克隆抗体和多克隆抗血清；通过与噬菌体展示随机肽库反应，筛选获得具有反应原性的抗原表位；再通过肽展示噬菌体扩增制备抗原后，以不同肽抗原免疫动物获得血清，进行病毒中和试验，进一步筛选获得可以产生中和抗体的肽展示噬菌体。为鲤春病毒血症的免疫预防提供良好的特异性免疫制剂候选抗原，也为利用该中和性抗原表位进行诊断等其他应用研究奠定基础。

鲤春病毒血症是鲤鱼一种重要的病毒病，目前鲤鱼对鲤春病毒血症病毒（SVCV）感染尚无有效的防治药物。SVCV糖蛋白是该病毒最重要的中和抗原，研究SVCV糖蛋白中和线性抗原表位，对于阐明SVCV致病机制和制定有效的防制策略至为关键。本研究首先制备SVCV单克隆抗体；并对单克隆抗体2A3 和 3H7免疫特性进行的鉴定。构建SVCV的 T7 噬菌体展示文库，并用特异性抗体对文库进行筛选，经过多轮淘筛，最后对富集度高的噬菌体克隆进行测序，并与 Genebank 中的序列进行比对。结果共获得 20个不同的噬菌体插入片段。将糖蛋白553- 559氨基酸片段与载体连接转化，并在宿主菌中进行融合表达。以单克隆抗体3H7对该融合蛋白进行抗原表达检测，经Wesetmblot分析，进一步确定SVCV糖蛋白的抗原表位。以抗原表位融合蛋白免疫易感动物，通过血清抗体水平，检测相应的免疫原性，从而确定抗原表位位点。为鲤春病毒血症特异性免疫制剂研究提供实验依据。