羟基红花黄色素A抑制人源化脓毒症小鼠外周血CD4+T淋巴细胞凋亡的作用及机制研究

The immunosuppression effect has become great concern when treating sepsis via preventing CD4+ lymphocytes excessive apoptosis.The possibility of treating immune suppression of sepsis through inhibiting excessive CD4+T lymphocyte apoptosis has become a widely concern.The only traditional Chinese medicine for sepsis therapy, Xuebijing injection consists mainly hydroxysafflor yellow A (HSYA), which can inhibit apoptosis via mitochondrial damage. Howere，It remains to be demonstrated that whether HSYA can treat sepsis via inhibition of abnormal CD4+ T lymphocyte apoptosis. Our previous studies have explored the underlying mechanisms of the treatment effect of Xuebijing injection on sepsis. we aim to establish the human immune system in the combined immunodeficiency mice by transplanting the human CD34+ cells to the mice.Through cecal ligation and puncture, we will model the human source pyogenic sepsis in mice. We aim to study the impact of HSYA on the relevant apoptosis genes and proteins expression of peripheral blood of inflammatory cytokines, CD4+T lymphocytes apoptosis, and the mitochondrial damage. By inhibiting different path way of apoptosis respectively in vivo study, we will further our understanding of the effect of HSYA on the mitochondrial damage of CD4+T lymphocytes. We aim to find the drug targets by verifying the mechanisms of inhibition effect of HYSA on peripheral blood of CD4+T lymphocytes apoptosis via mitochondrial damage.

阻止CD4+T淋巴细胞过度凋亡治疗脓毒症时的免疫抑制是目前研究的热点。血必净注射液是国际上唯一纯中药治疗脓毒症的药物，其主要有效成分羟基红花黄色素A（HSYA）可通过线粒体损伤途径抑制细胞凋亡，然HSYA是否可通过阻止CD4+T淋巴细胞过度凋亡抗脓毒症？尚有待阐明。本项目基于前期对血必净注射液治疗脓毒症作用机制的研究基础，拟在联合免疫缺陷小鼠移体内移植人CD34+细胞，鉴定小鼠体内成功建立人的免疫系统后，应用盲肠结扎穿孔法制备人源化脓毒症小鼠模型，研究HSYA对外周血CD4+T淋巴细胞凋亡及线粒体损伤通路各凋亡因子基因和蛋白表达的影响，分析HSYA对脓毒症的治疗作用及机制，在体外细胞模型，深入观察HSYA对CD4+T淋巴细胞凋亡线粒体损伤途径的影响。确证脓毒症时HSYA通过线粒体损伤途径抑制外周血CD4+T淋巴细胞凋亡治疗脓毒症的作用机制，筛选药物作用靶点。

羟基红花黄色素A( HSYA)单独治疗脓毒症的作用国内外未见报道。本项目是基于前期对血必净注射液治疗脓毒症作用机制的研究基础，拟在联合免疫缺陷小鼠体内建立人的免疫系统，应用盲肠结扎穿孔法制备人源化脓毒症小鼠模型，研究HSYA对脓毒症的治疗作用及机制。在体外细胞模型，深入观察HSYA对CD4+T淋巴细胞凋亡线粒体损伤途径的影响。. 重要的研究结果与意义：.1．脓毒症时多种促炎细胞因子和抗炎细胞因子的平衡失调，导致了脓毒症患者的免疫功能紊乱。IL-6，IL-10等炎症因子的过度释放与疾病的严重程度密切相关。我们的研究结果显示：脓毒症时IL-6， IL-10和 TNF-a的水平明显增加，HSYA可明显减少脓毒症时IL-6，IL-10和 TNF-a的过度释放。脓毒症中T细胞的异常凋亡可促进脓毒症的发展，导致多器官衰竭甚至死亡。我们证实了脓毒症时外周血T淋巴细胞出现的大量凋亡，其中以CD4+T淋巴细胞凋亡为主，CD4+/CD8+比率明显下降。我们研究结果显示HSYA可明显抑制外周血CD4+T的淋巴细胞凋亡，缓解CD4+/CD8+比率失衡。改善脓毒症时免疫失衡，对脓毒症具有治疗作用。.2． 线粒体及线粒体损伤途径在脓毒症患者的淋巴细胞凋亡中起着决定性的作用。线粒体凋亡途径与线粒体跨膜电位的消失及Bcl-2 家族蛋白促凋亡和抑制凋亡的功能等相关。细胞色素C 的释放可触发Caspases的级联效应，首先激活caspase9， caspase9进一步激活下游的caspase3，诱发细胞凋亡。我们惊奇的发现HSYA能上调Bcl-2蛋白的表达，抑制Bax, Cytc, caspase3, and caspase9的表达。结合体外模型中，HSYA可以明显缓解脂多糖对外周血T淋巴细胞增殖的抑制作用，减轻脂多糖诱导的T淋巴细胞线粒体膜电位的损伤，阐明了HSYA减少CD4+T凋亡的机理。