间充质干细胞通过wnt信号通路调节Ｂ淋巴细胞分化治疗慢性移植物抗宿主病的机制研究

Chronic graft-vesus-host disease(GVHD) represents considerable morbidity and significant mortality after allogeneic hematopoietic stem cell transplantationis. Treatment with combinations of corticosteroids and a calcineurin inhibitoris far from satisfactory.We have reported mesenchymal stem cell might be a safe and effective therapy for steroid-resistant chronic GVHD, and this therapeutic effect was played by influencing the direction of B lymphocyte development, increasing the number and the fucntion of CD5+ B lymphocytes(leukemia, 2015）. But the exact modulating mechanisms of MSCs for CD5+ B lymphocyte development are still unknown. Based on the previous results, we further compared the differential gene expression profiles of mesenchymal stromal cells from cGVHD patients, the results showed that the expression level of wnt5a was significantly higher in cGVHD patients after MSC treatment. Thus, we will explore the role of wnt5a on CD5+ B cells development, and the relationship of the expression level of wnt5a and MSC thereaputic effect on cGVHD.New data from these experiments , not only help to elucidate the development of CD5+ B cells and the mechanisms of MSC therapy, but also shed new light on the treatment for other autoimmune diseases in the near future.

慢性移植物抗宿主病(cGVHD)是影响同种异体造血干细胞移植临床疗效和病人生存质量的最主要因素，目前常规的治疗方案效果不理想。课题组前期研究结果揭示了间质干细胞(MSC)治疗难治性cGVHD的安全性和有效性，并首次阐明MSC影响B细胞的分化发育，且主要通过调节性CD5+B细胞发挥治疗作用（leukemia, 2015），但具体机制尚不明确。进一步比较MSC治疗前后cGVHD病人骨髓间质干细胞表达谱的差异，发现完全缓解的病人治疗后wnt5a的表达水平明显增高。据此，本项目拟利用体内外模型探究wnt信号通路在CD5+B细胞分化发育中的作用，明确wnt5a表达水平与MSC减轻cGVHD症状之间的关系。通过以上研究，不仅有助于了解CD5+B细胞分化发育过程和慢性移植物抗宿主病的发病机制，还将揭示MSC治疗的细胞与分子基础，为进一步扩大MSC的临床应用范围提供有力的理论证据。

越来越多的研究显示分泌白细胞介素-10（IL-10）的调节性B细胞（Bregs）在多种免疫相关疾病的病理过程中发挥重要作用，课题组的前期研究结果表明，Bregs的变化与 MSCs的治疗效果密切相关，提示Breg可能成为MSCs发挥治疗作用的关键靶标。在此项研究中，直接加入wnt5a不能直接诱导CD5+ B细胞产生IL-10增多，但使用抑制剂后，我们发现wnt信号通路的抑制减少CD5+ B细胞IL-10的产生，免疫调节能力减弱，体内治疗效果不佳。同时，研究还发现wnt信号通路对CD5+ B细胞免疫调节能力的影响是通过HIF-1α水平发挥作用。这些结果为深入理解MSC调节CD5+ B细胞功能、及其在免疫失衡的疾病中治疗机制奠定基础。.由于IL-10+ Bregs是一群具有多种表型特征的异质细胞群，我们利用MSCs与B细胞的共培养体系，借助多色流式细胞技术发现MSCs共培养后的IL-10+ B细胞显著富集于CD23+CD43+B细胞亚群；进一步利用B/T细胞共培养模型证实MSCs诱导的CD23+CD43+B细胞具有免疫调节功能且其调节作用依赖于IL-10的分泌；同时发现MSCs可以促进CD23+CD43+B细胞增殖、诱导CD23-CD43-B细胞转为CD23+CD43+B细胞；COX2/PGE2通路参与了MSCs增加CD23+CD43+B细胞。此外，利用结肠炎模型发现MSCs能显著改善结肠炎症状，并伴随着CD23+CD43+ Bregs的增加；采用过继治疗的手段证实CD23+CD43+B细胞能显著改善结肠炎；在此基础上，借助B细胞缺失的小鼠模型证实CD23+CD43+B细胞在MSCs治疗炎性肠病的核心作用，为推进MSCs治疗肠道炎性疾病的临床转化奠定基础，也为MSCs治疗其他免疫相关疾病提供重要的实验依据。