TLR2信号通路在碘诱导自身免疫性甲状腺炎作用的机制及干预研究

Autoimmune thyroid disease (AITD) is a common autoimmune disease. With the increasing of iodine intake, the prevalence rate increased throughout the nation. However, the mechanism of iodine induced autoimmune thyroiditis is still unclear. Some studies shows excessive iodine intake can cause increased apoptosis of thyroid cell, so did in our group. We also found the expression of TLR2mRNA increased significantly in iodine induced thyroiditis in mice model, and necrosis, apoptosis cells are the important endogenous ligands of TLR2. Based on the above background, this study uses iodine induced NOD.H-2h4 thyroiditis mice animal model and in-vitro experiment to explore the relationship between TLR2 signaling pathway and the occurrence and development of AITD. Through studies of TLR2 signaling pathway activation and inhibition in vivo and in vitro test, we want to verify the new hypothesis: Iodine excess- necrosis and apoptosis of thyroid cell increased- TLR2/MyD88/NFκB signaling pathway activation-cytokines increased-AITD, and to reveal the pathogenic role of TLR2 in AITD. We hope TLR2 inhibition for immune intervention of AITD to provide a new way and target therapy, and provide a theoretical basis for prevention and treatment of major diseases.

自身免疫性甲状腺疾病（AITD）为常见的自身免疫性疾病，随着碘摄入量的增多，其患病率在全国范围内有普遍增高的趋势，然而碘引起AITD发生的机制仍不清楚。大量文献显示，过量碘摄入可以引起甲状腺细胞凋亡增加，本研究组前期工作也发现了这一现象，同时发现碘诱导甲炎小鼠模型的甲状腺组织中TLR2mRNA表达明显增加，而坏死、凋亡细胞的碎片是TLR2的重要内源性配体。立足于上述研究背景，本项研究利用碘诱导NOD.H-2h4 甲炎小鼠模型及体外实验，探索TLR2信号通路激活与AITD发生发展的关系。通过体内、体外TLR2信号通路激活及抑制实验，验证碘过量-甲状腺细胞坏死、凋亡增加-TLR2/MyD88/ NFκB信号转导通路激活-炎性因子释放增加-AITD发生的新假说。揭示TLR2在AITD中的致病作用，希望TLR2抑制实验为AITD的免疫干预治疗提供新的途径和靶点，为重大疾病的防治提供理论依据。

有临床研究发现TLR2信号通路参与自身免疫性甲状腺炎（AIT）疾病的发生，但其机制尚未明确。本研究首次从高碘通过引起甲状腺细胞凋亡激活TLR2信号通路来探讨其治疗AIT的免疫机制。首先不同时间点小鼠体内实验研究表明，TLR2信号通路在AIT发病中占有重要作用。然后进一步在小鼠体内实验干预，4周龄NOD.H-2h4小鼠被随机分为六组：对照组、SAT组(高碘水喂养)、TAT1组（高碘水与8周后给予TLR2阻断剂）、TAT2组（高碘水与2周后给予TLR2阻断剂）、AAT1（高碘水与TLR2激动剂）、AAT1（无菌水与TLR2激动剂）6周后，测定甲状腺局部炎症，血清TgAb水平，树突状细胞成熟，炎性因子，TLR2信号通路蛋白及凋亡的表达。然后以原代培养的小鼠甲状腺细胞为研究对象，进行体外实验。分别给予高碘诱导或TLR2激动剂或抑制剂干预，观察甲状腺细胞表面树突细胞的表达，检测TLR2信号通路的激活，观察凋亡细胞数以及其分泌的炎性因子的水平。结果显示：体内实验中，与SAT组相比，TAT组可以显著减轻甲状腺局部淋巴细胞浸润，降低血清TgAb水平，TLR2信号通路蛋白以及caspase3表达降低，炎性因子表达下降.体外实验中，OXPAPC或TLR2基因沉默干预抑制CD11c+树突状细胞表面CD80及CD86水平降低，给予高碘诱导甲状腺细胞明显激活TLR2信号通路蛋白表达，TLR2激动剂干预后刺激甲状腺细胞凋亡及分泌的炎性因子水平增加。 . 以上结果提示，以高碘可以诱导甲状腺细胞凋亡，激活TLR2 信号转导通路激活，对 AITD 疾病发生发展的影响，在自身免疫性甲状腺炎中，TLR2信号通路发挥了重要作用，并通过 TLR2通路的阻断治疗抑制了凋亡细胞的表达以及树突细胞的成熟，进而减轻了甲状腺自身免疫炎症。