延髓头端腹外侧AT1受体介导谷氨酸能神经元敏感化在紧张应激性高血压中的作用及其机制

A close relationship exists between sympathetic nervous hyperactivity and the development of hypertension. In our previous studies, angiotensin II （AngⅡ）type 1 receptor (AT1R) was detected on the glutamatergic neurons of rostral ventrolateral medulla (RVLM), and rise of AngⅡ and AT1R in the RVLM in stress-induced hypertension rats, however, the mechanism is not clear. This topic would be conducted from from animal to molecular level with morphological, electrophysiological, pharmacological and molecular biological methods, and adopt stress-induced hypertension rats and AT1aR-/- gene knock-out rats to study the effect and its mechanism of sensitization of glutamatergic neurons in the RVLM mediated by AT1R on stress-induced hypertension, and to explore the correlation between NADPH-ROS-MAPK-transcription factor AP-1 signal passageway and the sensitization of glutamatergic neurons mediated by AT1R. To definite the role of AT1R in sympathetic hypertension by activating or inhibiting AT1R to influence blood pressure and to regulate the release and receptor expression of glutamate from positive and negative sides, which would provide new idea for the pathogenesis of hypertension, and theoretical basis for central mechanism of AT1R antagonist to decrease arterial blood pressure.

交感神经活动亢进与高血压发生、发展密切相关。我们前期研究发现大鼠交感中枢延髓头端腹外侧区(RVLM)谷氨酸能神经元上有血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体（AT1R）表达，并且AngⅡ和AT1R在紧张应激性高血压大鼠RVLM增加，但机制不清。本课题拟用形态学、电生理、药理、分子生物学等方法从整体、组织和分子三个水平，以紧张应激性高血压大鼠及AT1aR-/-基因敲除大鼠模型为对象，对AT1R介导RVLM谷氨酸能神经元敏感化在紧张应激性高血压的作用及其机制进行研究，探索谷氨酸能神经元中的NAD(P)H氧化酶-ROS- MAPK-转录因子AP-1细胞信号通路与AT1R介导的谷氨酸能神经元敏感化的关系，从正、反两方面激活或抑制脑内AT1R影响血压、调节谷氨酸释放及其受体表达明确AT1R在交感紧张性高血压中的作用，以期为高血压的发病机制提供新的思路，并为AT1R拮抗剂在中枢的降压机制提供理论依据。

背景：位于延髓头端腹外侧区（rostral ventrolateral medulla，RVLM）的血管紧张素（Angiotensin II，Ang II）在高血压的进展中起重要作用。然而，该区的AngⅡ在紧张应激性高血压发生发展中的作用及其分子机制尚不清楚。本研究假设，大鼠紧张应激后，通过RVLM谷氨酸能神经元上的AT1R，激活NADPH氧化酶产生的活性氧簇（ROS)-丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)信号通路，促进AT1R表达，最终导致血压升高。.方法：在紧张应激性高血压大鼠RVLM，我们首先通过免疫荧光三标法确定AngⅡ1型受体 (AT1R)与NADPH氧化酶亚基gp91phox是否共定位在谷氨酸能能神经元上。然后，通过免疫印迹和免疫组织化学定量分析p38 MAPK，细胞外信号调节激酶（ERK)1/2和应激活化蛋白激酶/ Jun氨基末端激酶（SAPK/JNK)的活化。高效液相色谱荧光检测法测定RVLM及脊髓中间外侧柱谷氨酸含量。大鼠RVLM微量注射NADPH 氧化酶抑制剂（apocynin），SAPK/JNK激酶抑制剂（SP600125）、p38 MAPK抑制剂（SB203580），或ERK1 / 2（U0126）抑制剂后，分别记录平均动脉压和心率。.结果：我们发现，在紧张应激性高血压大鼠RVLM 上，AT1R和gp91phox的共定位在谷氨酸能神经元，且脊髓中间外侧柱谷氨酸释放增加。与对照相比，紧张应激性高血压大鼠RVLM p38 MAPK、ERK1 / 2、SAPK/JNK和ROS的产生明显升高，这种升高能被apocynin或AT1R拮抗剂坎地沙坦阻断。此外，紧张应激性高血压大鼠RVLM 的AT1R的高表达能够被侧脑室慢性注射SP600125抑制，但不能被SB203580、U0126抑制。在功能上，RVLM 微量注射apocynin，或SP600125能显著降低紧张应激性高血压大鼠的血压。.结论：结果表明，紧张应激性高血压大鼠的血压升高是通过RVLM谷氨酸能神经元上的AT1R，激活NADPH氧化酶-ROS-SAPK/JNK信号通路，促进AT1R生成增加这一正反馈完成的。