人上皮性卵巢癌相关的新NAT分子FAT1-AS的鉴定及功能分析

研究表明，自然反义转录子（NAT）是一类具有重要基因表达调控功能，且与人卵巢癌密切相关的RNA分子。FAT1可调控肿瘤相关的Hippo信号通路的活性，使细胞增殖相关基因失活，是新发现的重要抑癌基因。我们前期研究发现一个新的卵巢癌相关NAT分子FAT1-AS，其作用靶点为FAT1 mRNA。我们推测在卵巢癌的发生发展过程中，FAT1-AS可能通过抑制FAT1的表达，进而激活Hippo信号通路的相关分子，导致细胞增殖和肿瘤发生。为证实这一假设，本研究拟先用5'RACE扩增获得FAT1-AS的全长序列，用定量RT-PCR检测FAT1-AS在不同卵巢组织间的表达差异，再用表达载体构建和转染、RNAi、分子杂交及裸鼠接种等方法研究FAT1-AS对FAT1表达调控的分子机制和对卵巢癌细胞增殖的影响，以深入揭示其功能，并初步阐明FAT1-AS在卵巢癌发病过程中的作用，具有重要的理论意义和潜在应用前景。

自然反义转录子（Natural antisense transcripts，NATs)是一种具有重要生理功能的非编码RNA，FAT1是近年发现的强抑癌基因。本课题原计划在筛选到一定位于FAT1 mRNA的NATs（命名为FAT1-AS，长度为44nt）的基础上，先用5′和3′RACE扩增FAT1-AS的全长分子，然后再探讨其在卵巢癌发生中的功能和作用机制，但在课题实施后，用5′和3′RACE均无法扩增延长FAT1-AS分子，我们推测FAT1-AS为假阳性分子或为其他非编码RNA。基于以上结果，我们调整了实验方案，围绕NATs和FAT1两条主线，开展了一下工作：1.建立了一套完整的肿瘤相关NATs筛选的实验体系，已申请国家发明专利；2.经过实验证实，FAT1的5′启动子区存在GR的结合位点，3′UTR区与miR223结合，因此FAT1的表达受GR和miR223的调控；3.在卵巢癌组织中筛选到一肿瘤特异性NATs分子ET1-AS，并已初步证实ET1-AS可上调其靶基因ET1 mRNA的表达；4.对前期研究的NATs分子mucD-AS的研究结果进行了完善，发表SCI论文一篇。