基于球后成纤维细胞Th1/Th2细胞因子失衡的中药复方治疗TAO机制研究

In the present study, we investigated the effects of Xiehuo Pingtu Powder and Huoxue Pingtu Powder and Yangmu Pingtu Powder on the cell proliferation, the synthesis of hyaluronic acid and collagen, matrix rotetnases 1, tissue inhibitor of metalloproteinase，monocyte chemotactic protein 1，and the express of the regulated upon activation normal T cell expressed and secreted，the express of human leucocyte antigen-DR, intercellular adhesion molecule-1, CD40，and the activation of mitogen-activatedp rotein kinaseand nuclear factor-kappa B on the cultured retro-ocular fibroblasts from patients with Thyroid associated ophthalmopathy induced by IFN-γand IL-4. We hope we can find the effect Mechanism of Traditional Chinese medicine compound on retro-ocular fibroblasts base on the unbalance of Th1/Th2 cytonike.

本研究拟通过体外培养甲状腺相关眼病（TAO）患者眼球后成纤维细胞，运用放射免疫法、免疫细胞化学法、Western blot、荧光显微镜、流式细胞术等方法和技术，观察泻火平突散、活血平突散、养目平突散含药血清对Th1细胞因子IFN-γ和Th1细胞因子IL-4干预后球后成纤维细胞增殖，透明质酸等细胞外基质的合成，基质金属蛋白酶-1、组织抑制剂-1等相关调节因子的表达，细胞粘附分子-1、人类白细胞-DR抗原、CD40等免疫调节因子的表达，以及丝裂素活化蛋白激酶和核转录因子等信号转导通路等的影响。以期从调整Th1/Th2细胞因子失衡方面探讨泻火平突散、活血平突散、养目平突散对TAO的免疫调节治疗机制。

项目背景：球后成纤维细胞（RFs）以及细胞因子在甲状腺相关眼病（TAO）发展中起重要作用。本课题观察中药含药血清对Th1、Th2细胞因子干预后RFs增殖，细胞外基质合成，免疫调节因子表达以及信号转导通路的影响，研究TAO细胞因子表型与中医证型的关系以及中药复方治疗TAO的机制。主要研究内容：本研究从拮抗Th1细胞因子IFN-γ和Th2细胞因子IL-4对RFs生物学活性影响，调节Th1/Th2失衡方面，探讨泻火平突散、活血平突散、养目平突散治疗TAO的机制。RFs与IFN-ϒ、IL-4以及中药复方血清孵育后，MTT法检测RFs的增殖；ELISA法检测HA和胶原的合成；免疫细胞化学染色检测MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2的合成，ERK1/2、JNK、P38MAPK、ERK5等信号转导通路及核转录因子(NF-kappaB) 活性；流式细胞仪检测ICAM-1、HLA-DR、CD40的表达。重要结果：1.中药复方血清对RFs的增殖均有抑制作用。2.中药复方血清明显抑制IFN-γ、IL-4刺激后HA和I、Ⅲ型胶原的过度表达；IFN-γ为刺激因子时，泻火平突散的作用更明显；IL-4为刺激因子时，养目平突散的作用更明显；IFN-γ和IL-4共同刺激时，活血平突散的作用更明显。3. IFN-γ、IL-4刺激后MMPs、TIMPs合成紊乱，中药复方血清能够调节使其平衡；IFN-γ为刺激因子时，泻火平突散的作用更明显，IL-4为刺激因子时，养目平突散作用更明显，IFN-γ和IL-4共同刺激时，活血平突散的作用更明显。4. 中药复方血清能够抑制IFN-γ、IL-4诱导ICAM-1、HLA-DR、CD40过度表达。5. 中药复方血清能够抑制IFN-γ、IL-4的刺激作用，阻断ERK1/2、JNK、P38MAPK、ERK5信号通路的传递，抑制NF-kappaB的活性。科学意义：本实验表明RFs 细胞因子表型与中医证型呈对应关系。在TAO急性期以Th1 细胞因子为主时，中医证属肝火旺盛；中期Th1、Th2 型细胞因子同时存在时，证属痰瘀互结；静止期以Th2 型细胞因子为主时，中医证属肝肾阴虚，痰瘀互结。中药复方治疗TAO机制可能与恢复Th1/Th2 细胞因子失衡有关。