人巨细胞病毒UL141基因不同转录子表达调控的研究

人巨细胞病毒（HCMV）是引起先天感染和出生缺陷的主要病原体之一，可以造成多系统多器官疾病和畸形。HCMV具有复杂的表达调控机制，在病毒致病过程中发挥重要作用。UL141基因是重要的免疫调节基因，编码产物能够使病毒逃避NK细胞的杀伤。该基因具有多种转录子。本研究应用荧光素酶报告系统研究UL141基因不同转录子上游非编码序列的启动子活性，并确定各自的启动子序列和调控序列；应用酵母单杂交系统在已经构建的HCMV-人胚肺细胞cDNA酵母文库中筛选UL141基因不同转录子调控序列的特异性结合蛋白，并通过电泳迁移率变动分析方法鉴定筛选的蛋白与调控序列的特异性结合能力，确定UL141基因不同转录子调控序列的转录因子，从而揭示UL141基因的表达调控机制。本研究将从基因的表达调控水平进一步认识UL141基因生物功能，研究HCMV致病机理，对预防和治疗HCMV感染，减少HCMV感染致畸儿出生具有重大意义。

人巨细胞病毒（HCMV）感染是引起出生缺陷和新生儿疾病的重要因素之一。HCMV UL/b’区基因预测编码19个开放阅读框（Open Reading Frame, ORFs）,存在于致病性更高的临床分离株中，而在致病性较弱的实验室株中缺如。UL141基因位于与病毒致病密切相关的UL/b’区域，其表达产物能够下调感染细胞表面的CD155和CD122分子，从而逃避NK细胞的杀伤作用，发挥免疫调节功能。本项目应用Northern blot、cDNA文库筛选、RACE、RT-PCR等方法对HCMV 临床低传代分离株的UL141基因转录情况进行深入研究。结果表明，UL141基因在临床分离株的感染晚期表达一簇转录子。这些转录子具有共同的3’末端，不同的5’末端。并且在这些转录子中预测了可能存在的新的ORF。应用荧光素酶报告基因检测技术在UL141转录子5’端的上游DNA序列中确定了UL141基因转录子的核心启动序列，增强子序列和抑制子序列的范围。结合酵母单杂交技术及生物信息学预测，筛选并预测了与增强子序列结合的转录因子TFAP-4。通过酵母单杂交筛选得到可能与抑制子序列结合的HCMV RL5A蛋白。应用电泳迁移率实验（EMSA）对增强子序列与转录因子TFAP4-的结合能力进行了鉴定，证明了转录因子TFAP-4与增强子序列的体外结合能力。本研究从基因转录水平研究了UL141基因的表达特点与调控机制，发现并证明了UL141基因增强子序列元件及其结合的转录调控因子，对于进一步理解UL141基因的表达调控特点及生物学功能具有重要意义。