RNAi技术逆转粘液表皮样癌MEC-1/5-FU细胞多药耐药性

根据Gene Bank提供的多药耐药基因MDR1序列的开放阅读框和Downward J提出的原则，设计多条siRNA和shRNA片段，用荧光素酶作报告基因，构建表达载体DNA, 分别采用阳离子脂质体和配体靶向纳米微粒转染法对体外培养的人粘液表皮样癌耐药细胞MEC-1/5-FU进行转染，检测转染效率、用RT-PCR、Western blot检测细胞MDRl mRNA、多药耐药蛋白P-gp的表达，筛选出效率较高的siRNA或shRNA片段和转染方法进行后续研究。用MTT 法检测细胞对5-氟尿嘧啶、长春新碱、长春花碱、表阿霉素和平阳霉素耐药性逆转率。建立MEC-1/5-FU细胞祼鼠移植瘤模型，采用瘤周注射法、静脉注射法给裸鼠体内投递siRNA,检测siRNA在祼鼠体内的转染效率、靶向分布以及对肿瘤生长的抑制率，计算耐药性逆转率。为RNAi技术逆转涎腺粘液表皮样癌耐药性提供试验依据。