SEC5通过调控滋养层细胞的MIF分泌功能而影响蜕膜巨噬细胞极化活性的作用机制及其与复发性流产的关联

The cause of recurrent spontaneous abortion (RSA) is multifactorial, and immunological rejection of the fetus by the maternal immune system is postulated to be a main cause of unexplained RSA, but its aetiology remains largely unknown. A successful pregnancy involves complex interactions between fetal trophoblasts and maternal decidual immune cells to establish an appropriate immune microenvironment at the maternal-fetal interface, including the M1/M2 polarization of macrophage during the pregnancy process. MIF, expressed in human pregnancy by both fetal trophoblast and maternal uterus, is invloved in the regulation of macrophage polarization, and dysfunction of MIF might be related to the aetiology of RSA. SEC5 has been reported to be involved in the regualtion of cytokines sectretion, and expressed in placentation. Our previous data showed that, SEC5 could modulate the channel activity of InsP3R through directly interaction with InsP3R, and the expression level of SEC5 in the placenta villi of RSA patients was remarkably increased. Furthermore, down-regulated expression of SEC5 could promote the secretion of MIF in human villous explant. Thus, we hypothesize that, SEC5 might affect the polarization of decidual macrophages by regulating the MIF secretion of trophoblast cell. And in this study, we plan to investigate effects of SEC5 on MIF secretion via InsP3R/Ca2+/SP1 signaling pathway in trophoblast cells, and the paracrine effects of MIF on macrophages polarization, to further explore the aetiology of RSA.

复发性流产（RSA）病因复杂，而免疫因素被认为是主要病因之一，唯其病理机制尚不明。母胎界面免疫微环境稳态是正常妊娠的必要保障，涉及蜕膜巨噬细胞的M1/2型极化活性调节，而MIF具有调控巨噬细胞极化作用，并与RSA病理过程密切相关。SEC5具有调控细胞因子分泌和固有免疫反应作用，在胎盘中也有表达。我们在前期研究中发现，SEC5可通过与InsP3R相互作用调控其钙离子通道活性，并在RSA患者绒毛组织中异常高表达，敲低SEC5表达能促进人绒毛外植体中MIF的分泌。由此推测，SEC5可能通过调控滋养层细胞MIF的分泌而影响蜕膜巨噬细胞极化偏移。本项目拟从临床样本观察、离体及在体水平三方面，研究分析滋养层细胞中SEC5表达水平的改变，是否通过InsP3R/Ca2+/SP1信号通路调控MIF分泌，而MIF分泌量的变化是否又通过旁分泌作用导致巨噬细胞的极化偏移，从而为RSA病理机制的研究提供新线索。

复发性流产（RSA）是严重危害女性生育健康的临床常见病理妊娠疾病。RSA病因复杂，尚有50%以上病因未明。母胎界面各类细胞正常行使功能是正常妊娠建立和维持的根本。组成母胎界面微环境的细胞主要有胚胎来源的绒毛外滋养层细胞，母体来源的蜕膜基质细胞和蜕膜免疫细胞等。.SEC5是胞外分泌复合物的一个组成蛋白，在细胞生存和运动、固有免疫调节等发面具有重要作用，然而其在早期妊娠中的功能未见报道。本项目较为系统地研究了SEC5在滋养层细胞和蜕膜巨噬细胞（dMφ）生物学功能中的作用。我们首先系统研究了SEC5在小鼠各发育阶段胚胎及围植入期子宫组织中表达和分布。在人早孕期绒毛组织中，SEC5主要表达在细胞滋养层细胞及绒毛柱中，并且其表达下调抑制绒毛外滋养层细胞的侵袭和迁移。进一步研究结果显示SEC5表达降低一方面通过抑制滋养层细胞HTR-8/SVneo中integrin β1的表达和细胞表面分布，另方面抑制InsP3R介导的Ca2+信号，从而使细胞内F-actin结构破坏，从而调控绒毛外滋养层细胞的侵袭和迁移能力。.此外，我们利用免疫磁珠法分离了原代dMφ，发现SEC5在不明原因RSA患者较人工流产妇女dMφs中表达显著降低。在人THP-1和小鼠BMDM体外诱导模型中，我们发现SEC5通过与STAT6相互结合，调控其磷酸化活性，从而调节巨噬细胞M2极化活性，并且能够通过旁分泌作用调节滋养层细胞的增殖和侵袭功能。在LPS诱导的小鼠流产模型中，我们发现SEC5表达显著下降，并且SEC5杂合敲除小鼠对低剂量诱导的流产更敏感，且子宫组织中促炎因子IL-1α、TNF-α、MCP-1、IL-1β、IL-6均显著升高。.综上所述，本项目研究结果提示，SEC5在滋养层细胞、蜕膜巨噬细胞中表达异常可能一方面通过影响滋养层细胞的侵入能力，另一方面导致蜕膜巨噬细胞极化偏移异常，从而成为RSA发生发展的病因之一。