血管紧张素2型受体过表达对前列腺癌裸鼠移植瘤生长的影响

前列腺癌是男性生殖系常见的恶性肿瘤, 其发病率在西方一些国家仅次于肺癌, 死亡率居各类恶性肿瘤的第二位。在我国发病率虽较低,　但近年来呈显著增长的趋势。已有资料表明血管紧张素II(AngII)能够通过其1型受体（AT1R）直接刺激前列腺癌细胞的生长。在雄激素非依赖性前列腺癌患者, AT1R拮抗剂能够降低前列腺特异性抗原, 改善患者行为能力。而AngII 的2型受体（AT2R）的存在能够抑制EGF诱导的前列腺癌细胞的生长。我们最近的研究证明AT2R的过表达能够诱导多种前列腺癌细胞凋亡但不导致正常前列腺细胞发生凋亡(Hongwei Li等,Mol Cancer Ther.2009 Dec;8(12):3255-65)。本项目的目的就是在前列腺癌移植瘤模型上研究腺病毒介导的AT2R过表达对前列腺癌细胞的生长，转移及细胞凋亡的影响,从而为将AT2R作为靶基因进行列腺癌基因治疗研究打下基础。

肾素-血管紧张素系统成分已成为癌症的重要标志物。已有资料表明血管紧张素II(AngII) 2型受体（AT2R）位于前列腺腺泡上皮细胞层而在Gleason评分6或更高的前列腺癌中表达降低，我们以前的研究发现AT2R过表达可诱导多种前列腺癌细胞而非正常前列腺腺细胞凋亡，这种作用并不需要AngII的存在，而依赖于p38、caspase-8和 caspase-3的激活。本项目进一步研究AT2R促前列腺腺细胞凋亡的机制并在在动物模型上研究AT2R过表达对前列腺癌细胞的生长及细胞凋亡的影响。. 首先我们利用PCR Array技术对与AT2R介导的细胞凋亡可能的相关基因进行全面评估，结果表明表达上调的基因有：TRAIL-R2、 BAG3、BNIPI、HRK、Gadd45a、TP53BP2、 IL6和 IL8；上调的microRNA为microRNA 150；下调的基因为 TNFSF10、BMP6和BMP7。用RNA干扰技术抑制表达上调的基因，结果发现TRAIL-R2的下调较对照组可显著促进AT2R诱导的细胞凋亡，GADD45A下调后凋亡细胞数较对照组降低约30%。我们还发现，p38 MAPK、p44/42 MAPK 和p53的激活并不参与下调Gadd45a、TRAIL-R2 以及 HRK 对AT2R诱导的前列腺癌细胞凋亡的影响。. 在我们前期证实AT2R过表达可以在体外诱导前列腺癌细胞发生凋亡基础之上，本研究进一步探索AT2R在体内对前列腺癌细胞生长、凋亡的影响以及对裸鼠前列腺癌移植瘤的生长影响。将对数生长期的人前列腺癌DU145细胞接种于裸鼠左上侧腋下，建立裸鼠移植瘤动物模型。瘤内分别注射0.1ml 病毒载体Ad5-CMV-AT2R-EGFP, Ad5-CMV-EGFP或PBS，一次/三天，共6次，末次注射后三天，处死裸鼠。应用免疫组织化学方法和TUNEL凋亡法进行鉴定。结果显示：注射腺病毒AT2R组肿瘤体积明显小于对照组（P<0.05）。免疫组织化学结果显示增殖相关蛋白Ki67表达在AT2R组的表达明显低于对照组（P<0.01）。 TUNEL原位细胞凋亡检测中，AT2R组染色细胞数明显高于对照组（P<0.01）。. 本研究证实AT2R在体内能诱导前列腺癌细胞凋亡，并且可以抑制前列腺癌裸鼠移植瘤的生长, AT2R有望成为一个很有前景的前列腺癌基因