HBX介导的肾小管上皮细胞免疫调节作用研究

肾小管及间质炎细胞浸润及局部免疫微环境紊乱是造成肾脏局部损伤的重要因素。而肾小管上皮细胞（REC）作为非专职的抗原呈递细胞，可借助TLR4调节固有免疫和获得性免疫，参与局部免疫微环境的形成。课题组前期工作已发现乙肝肾（HBV-GN）REC中存在TLR4的异常表达，过度激活固有免疫，诱发细胞内的炎症反应。本课题拟以反式激活因子HBX为诱因，将通过体内、外实验深入探讨HBX介导的REC免疫调节作用，同时初步研究可影响REC分化的Notch1信号通路在REC介导的局部免疫微环境紊乱中的作用。应用RNA干扰和基因转染等技术研究HBX对REC分化、免疫相关分子表达格局、T细胞免疫及固有免疫的影响；对HBX转染的REC应用基因芯片筛选Notch信号通路差异表达基因；继而以Notch1信号分子为靶点，干预REC分化，改善局部免疫微环境紊乱，以减轻免疫损伤，为HBV-GN的临床治疗提供理论依据。

肾脏损伤是HBV感染最常见的一种肝外并发症，我国是HBV感染高发地区，乙肝相关性肾炎（Hepatitis B Virus-related glomerulonephritis, HBV-GN）已成为我国主要的继发性肾脏疾病之一。HBV能侵袭肾小管上皮细胞，在肾小管上皮细胞中转录、复制，引起肾脏病理损伤，在HBV-GN的发生发展中发挥重要作用。而HBx是HBV复制所必须的转录因子，具有反式激活作用，可通过反式调控同源/异源的病毒/细胞转录调节序列，促进病毒复制，诱导细胞凋亡，引起炎性反应的发生，在细胞转化、增殖中起重要作用。故本项目系统的研究：1）HBx对肾小管上皮细胞免疫调节作用的影响；2）HBx对肾小管上皮细胞激活T细胞及巨噬细胞作用的影响；3）Notch1受体在HBx介导的肾小管上皮细胞免疫活性异常中的作用。. 在本项目执行期间，我们首次发现了HBx质粒转染肾小管上皮细胞系HK-2细胞后可引起细胞数目和形态的变化，促进肾小管上皮细胞凋亡，诱导肾小管上皮细胞发生上皮-间充质细胞转分化，也诱导其表面MHC-Ⅱ分子及共刺激分子CD40的表达增加，使其表现出抗原提呈细胞的活性。当进一步将HBx转染的HK-2细胞与T细胞及巨噬细胞共培养之后发现，HK-2细胞能诱导CD4+T活化，细胞增殖增加，并诱导CD4+T细胞向Th1方向分化；HBx转染的HK-2细胞亦能激活巨噬细胞，导致其释放趋化因子和炎症因子。此外通过HBV-GN小鼠动物模型亦验证了肾小管上皮细胞具有抗原提呈细胞活性，高表达MHC-Ⅱ、CD40分子，诱导肾小管间质T细胞及巨噬细胞浸润增加。我们亦证实了Notch1受体在HBx介导肾小管上皮细胞增殖、凋亡、转分化及免疫活性异常中的起到重要作用。上调Nocth1的表达可促进肾小管上皮细胞的凋亡及转分化，增强其抗原提呈活性，加重炎症免疫反应。本研究深入探讨了HBV-GN进展的可能机制，为临床治疗HBV-GN提供了新的潜在靶点及理论依据。