Leptin/LEPR介导的急性髓性白血病MSC在白血病发病中的作用机理研究

急性髓性白血病（AML）的发病机理尚未阐明，间充质干细胞（MSC）是造血微环境中基质细胞的前体细胞，它定向分化的成骨细胞是造血干细胞（HSC）龛的主要细胞成分，对HSC原始性状的维持具有关键调控作用，并促进白血病细胞的增殖。我们发现AML患者MSC成骨分化功能较正常人显著增强，且体外支持白血病细胞增殖。通过Affymetrix基因芯片检测并经验证发现AML患者MSC与成骨分化和肿瘤相关的LEPR（Leptin receptor）等25个基因表达显著上调，而Leptin/LEPR对正常造血和骨代谢具有重要调节作用。本研究拟采用AML动物模型、抗体阻断试验和RNA干涉技术探讨：1.AML-MSC高表达LEPR是否与成骨细胞的"质和量"的变化有关；2.这种变化是否直接或间接调控白血病干细胞的功能特性；3.这种调控的具体机制是什么？本研究对揭示AML的发病机理和寻找治疗的新靶点具有理论和现实意义。

本项目首先从初诊AML患者和正常供者骨髓中分离培养MSC，两组MSC具有相似的细胞形态和免疫表型，均具有向脂肪细胞、成骨细胞和成软骨细胞分化的能力，但初诊AML患者向成骨细胞分化的能力明显增强。通过Affymetrix基因芯片检测并经验证发现AML患者MSC与成骨分化和肿瘤相关的LEPR（Leptin receptor）等基因表达显著上调。其次，通过混合淋巴细胞反应和淋巴母细胞转化实验证明MSC均可抑制异体T细胞的增殖，实时定量PCR检测两组MSC与免疫相关因子的表达无区别，应用小鼠GVHD模型研究发现，CCR7介导的MSC向二级淋巴器官的迁移可以通过抑制T细胞的增殖、活化和细胞毒作用而显著地抑制致命性重度移植物抗宿主病（GVHD）的进展，但不影响移植物抗白血病（GVL）效应。最后，分别利用正常MSC和患者MSC作为滋养层，考察两组MSC对急性髓性白血病细胞系HL-60细胞的体外作用及作用机制，结果表明患者MSC和正常MSC均呈剂量依赖性地抑制HL-60细胞的增殖，使 HL-60细胞更多地阻滞于G0/G1期，S期细胞减少，初诊AML患者MSC的作用更强，而处于G0-G1期的细胞对化疗药物不敏感；患者MSC和正常MSC均能够抑制化疗药物DNR诱导的HL-60细胞凋亡，患者MSC的抑制作用更明显，但两者无统计学差异。这种抑制作用与MSC改变HL-60细胞的周期进程以及促进HL-60细胞Survivin表达上调有关，提示MSC在AML的耐药中发挥着重要的作用。研究同时发现在初诊AML患者的白血病细胞中，EDAG可与NPM1相互作用，增加了NPM1的稳定性，从而抑制AML细胞的凋亡，在AML的耐药中发挥重要作用。.该项目在The FEBS Journal 和STEM CELLS发表SCI论文2篇，另有2篇论文已向Blood和Leukemia投稿。.