骨桥蛋白基因单体型影响江西赣南地区特发性草酸钙结石形成的分子机制研究

江西赣南地区为我国泌尿系结石高发区之一，草酸钙结石最常见，骨桥蛋白(OPN) 是其强抑制物。国外研究显示，OPN基因多态性位点与泌尿系结石发病相关，但其机制尚未阐明。国内尚未见OPN基因多态性与泌尿系结石相关性的报道。项目组前期研究发现OPN基因多态性位点-156 delG/G与特发性草酸钙结石（ICS）发病相关。 现有研究表明，与泌尿系结石发病相关的OPN基因多态性位点均位于启动子区；另外，OPN去磷酸化后，会降低它与草酸钙晶体的亲和力。我们推测，OPN基因多态性位点可能通过OPN基因转录调节和OPN蛋白翻译后修饰参与ICS形成。 为验证这一假说，本项目将继续选择OPN其它多态性位点，检测SNPs，分析基因型和单体型与ICS发病风险及表型的相关性，并从特定单体型影响转录调控和OPN蛋白质翻译后修饰入手，探讨OPN基因单体型影响ICS形成的分子机制，为ICS的基因治疗提供新的线索和思路。

江西赣南地区为我国泌尿系结石高发区之一。国外研究显示，OPN 基因多态性位点与泌尿系结石发病相关，但其机制尚未阐明。国内尚未见OPN 基因多态性与泌尿系结石相关性的报道。本项目将检测OPN多态性位点的SNPs，分析基因型和单体型与特发性草酸钙结石（ICS）发病风险及表型的相关性，并从特定单体型影响转录调控和OPN 蛋白质翻译后修饰入手，探讨OPN 基因单体型影响ICS 形成的分子机制。. 本研究对江西赣南地区218例ICS患者（ICS组）和同期187例正常人群，采用TaqMan-MGB 探针法检测OPN基因rs6840362、rs11439060、rs6532040、rs4754、rs9138、rs1126616、rs1126772、rs2728127位点单核苷酸多态性（SNPs）。并分析OPN基因型和单体型与ICS的相关性。结果显示，两组间rs11439060和rs9138位点等位基因和基因型频率的差异均具有统计学意义（P<0.05），rs6532040位点等位基因频率的差异具有统计学意义（P<0.05）；单体型CDATCCAA频数在ICS中显著增高（P=0.010）；rs11439060位点基因型与血尿酸浓度相关（P=0.016），rs11439060和rs2728127位点的基因型与尿钙浓度相关（P=0.040，P=0.037）；单体型C-G-delG与ICS的形成呈正相关，C-A-G与ICS的形成呈负相关。. 另，对34例ICS患肾组织标本和38例正常肾组织标本采用Real-time PCR法、Western blot法及免疫组织化学法分别检测实验组和对照组肾组织中OPN mRNA及蛋白的表达；酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定实验组、对照组和正常组尿液中OPN浓度。结果显示，ICS患者OPN mRNA及蛋白的表达均高于对照组，且ICS患者尿液中OPN蛋白浓度也增高。. 将所选择特定单体型CDATCCAA进行重组慢病毒（pLvx-IRES-ZsGreen-SPP1）包装，进行人肾小管上皮细胞干预实验。结果发现，单体型CDATCCAA可促进肾小管上皮细胞OPN mRNA和OPN蛋白的表达。本研究已成功建立特定单体型（CDATCCAA）转基因小鼠模型，但在构建草酸钙结石模型时，由于经验不足，转基因小鼠均死亡，实验未继续进行。