Fcα/μ受体介导的脂多糖促动脉粥样硬化形成新机制及其逆转

巨噬细胞吞噬oxLDL形成泡沫细胞是动脉粥样硬化发生的重要机制，天然自身IgM抗体通过与oxLDL结合抑制巨噬细胞吞噬而发挥保护作用。血清高浓度脂多糖/LPS与动脉粥样硬化发病密切相关，但其机理不明。我们发现，LPS可通过TLR4/p38MAPK/NF-κB通路上调IgM高亲和力Fcα/μ受体的表达，增加泡沫细胞的形成。而LPS促动脉粥样硬化的具体机制是需阐明的问题。本课题拟将LPS加入体外培养的巨噬细胞及高脂饲养apoE-/-小鼠中诱导Fcα/μ受体后，从细胞水平分析泡沫细胞产生、迁徙能力，从大体水平分析泡沫细胞表达情况、斑块体积和稳定性，并进一步分析IgM抗体F(ab')2段对Fcα/μ受体介导LPS促动脉粥样硬化过程的逆转作用。从而更精确地分析血清中LPS含量增高诱发动脉粥样硬化高发病率现象后的机制，对深入理解动脉粥样硬化的发病机制，寻找新的分子治疗靶点有重要意义。

本课题将LPS加入体外培养的巨噬细胞及高脂饲养ApoE敲除小鼠中诱导Fcα/μ受体后，从细胞水平分析泡沫细胞产生、迁徙能力，在活体水平分析泡沫细胞表达情况、斑块体积和稳定性，并进一步分析IgM抗体F(ab')2段对Fcα/μ受体介导LPS促动脉粥样硬化过程的逆转作用。从而更精确地分析了血清中LPS含量增高诱发动脉粥样硬化高发病率现象后的机制，对深入理解动脉粥样硬化的发病机制，寻找新的分子治疗靶点有重要意义。主要获得以下成果： .1.杂交瘤细胞分泌的抗LDL及抗oxLDL的天然抗体通过ELISA法被筛选出来，可以与LDL或oxLDL发生高亲和力结合，经过4次克隆化，最终获得2株稳定分泌天然属性抗LDL抗体，命名为5G8和2H7，及1株稳定分泌天然属性抗oxLDL抗体，命名为3A6，3株抗体均属于IgM亚类，无交叉反应，可以满足免疫印迹、免疫沉淀、ELISA等实验要求。.2.天然属性抗oxLDL IgM亚类抗体3A6，在体外试验中能够抑制巨噬细胞与铜氧化的LDL的结合，从而降低泡沫细胞的形成。.3.ApoE基因敲除小鼠高脂饲料喂养16周后，三组之间的各项血脂及oxLDL含量无明显差异；HE染色结果显示：三组均出现动脉粥样硬化斑块，但 3A6组可显著降低胸主动脉斑块面积和校正面积，与对照组和5G8组比较差异有显著性。.4.3A6不能抑制脂多糖活化的巨噬细胞对氧化的LDL的结合，并且促进氧化的LDL介导的泡沫细胞的生成。我们分别利用3A6 F(ab′)2、Fcα/μ受体RNA干扰或者利用不识别oxLDL的IgM抑制了oxLDL-IgM与脂多糖活化的巨噬细胞的结合，意味着Fcα/μ受体对这个过程是起作用的。同时，脂多糖促进Fcα/μ受体的表达有时间和剂量的依赖性，TLR4特异性中和抗体的封闭作用可减少LPS的作用。另外，脂多糖诱导的p38MAPK 磷酸化和NF-κB 65的转位促进了Fcα/μ受体表达的上调。