IFN-α/Treg在脓毒血症后免疫抑制状态的表观遗传学调控机制研究

Sepsis is a disease via TLR activation, and after acute inflammation septic patients often exhibit in the depth of immunosuppression, suggesting sepsis patients with higher mortality and secondary infection, evidence suggests that epigenetic modification of TLR ligand-induced (our preliminary results also suggested) may be one of the drivers factor of this immunosuppressive state. In septic shock , IFN-α-mediated TNF production ultimately lead to sepsis. Tregs may play a role in mediating post-septic immunosuppression through their ability to suppress inflam mation during subsequent infections, the incidence of sepsis process there is the synergistic effect of IFN-α/Treg. In this study, based on our preliminary research results and the latest literature reading, we firstly found that the TLR ligand-induced immune tolerance model in vivo and in vitro, we administered the main problem in post-sepsis immune response of IFN-α and Treg cells, and that clarify epigenetic regulation mechanism about TLR-inducd immunosuppressive in post-sepsis, and try to explore the epigenetic modification enzyme inhibitors in sepsis , provide a theoretical basis for the development of scientific and rational sepsis treatment program, improve the design of immunomodulatory oligonucleotide.

脓毒血症的发生与TLR受体的激活密切相关，脓毒血症患者在急性炎症期后，常处于深度的免疫抑制状态，预示着脓毒血症患者有更高的继发感染率和死亡率。研究表明（我们的结果也提示）TLR配体诱导的表观遗传学修饰是这种免疫抑制状态的驱动因素之一。在脓毒血症发病机制中，IFN-α是介导促炎性细胞因子产生的始动因子，Treg细胞是介导免疫抑制状态的主要功能细胞，在脓毒血症的发生过程中存在着IFN-α（因子）/Treg（细胞）间的协同作用。本研究立足我们的前期研究成果和最新的文献阅读，以TLR配体诱导免疫耐受模型为对象，从现代表观遗传学视角，紧紧围绕脓毒血症免疫应答中IFN-α/Treg细胞的免疫功能调控为主要问题，阐明TLR受体引起的脓毒血症后免疫抑制状态的形成机制；并尝试探索表观遗传学修饰酶抑制剂在脓毒血症的应用，为完善脓毒血症的免疫病理机制、制定科学的治疗方案和改进设计免疫调节性ODN，提供理论依据。

1..利用RAW264.7细胞和CAL-1细胞建立了TLR9细胞研究平台，分析了DNMT1，DNMT3A和DNMT3B表达情况。DNMT1其表达在RAW264.7细胞上有一定程度的变化，而DNMT3A的变化也比较明显，SAT05f作用前后有统计学意义，而DNMT3B酶的变化，与前两者变化不同；Sepsis小鼠原代培养巨噬细胞过免疫状态的TNF-α启动子区呈部分甲基化状态，与我们利用细胞系得出的结论是一致的；.2..Sepsis 小鼠体内存在着TNF-α和IFN-α基因基因的部分甲基化状态。我们的实验结果表明，Sepsis的后期这种抑制状态可能是受表观遗传学机制的调控，有一定的表观遗传学基础证据存在。TNF-α作为一种介导Sepsis的主要细胞因子，其表达在后期，受到一定程度的抑制，启动子去甲基化状态的存在，表明Sepsis发病机理中，有某些因素主导了DNA甲基化的修饰；.3..采用了CCK-8法优化了TNF-α和IFN-α的检测方法， SAT05f能抑制1826分泌的TNF-α对L929细胞的杀伤和IFN-α诱导的抗VSV作用，且具有明显的统计学意义；.4..在抑制性ODN的研究设计中，一定的核酸序列和核苷酸长度是必须优先考虑的技术指标。我们对SAT05f的结构进行了一系列的改变，以sepsis小鼠肝脏出血症状严重性为判断指标，比较后发现，单独增加ODN的长度无益于提高其治疗效果，而过短的长度也会导致其效果的下降；.5..分析了sepsis小鼠体内Treg细胞Foxp3 表达的表观遗传学调控机制及TLR7/9受体信号通路关键信号因子IRF-7的表达情况。FoxP3基因部分呈现了甲基化状态；1826和SAT50f很可能都是通过相同的受体CCR5被靶细胞摄入，CCR5的表达得到上调，而SAT05f由于抑制了IRF-7的表达，而使Ⅰ型干扰素的表达受到了抑制。