高通量克隆白腐真菌新木聚糖酶基因及其表达研究

木聚糖酶在造纸、食品、饲料、能源等工业中具有广阔的应用前景。目前国内外克隆的木聚糖酶基因主要来自低等真菌和细菌，种群多样的高等白腐真菌野生环境可产生多种木聚糖酶，但从中克隆出来木聚糖酶基因极少。本研究拟创新克隆方法，高通量克隆白腐真菌新木聚糖酶基因，即采用GWPCR方法克隆白腐真菌含内含子的木聚糖酶基因，导入米曲霉后，利用淀粉诱导的米曲霉启动子启动转录，通过RT-PCR获得全长cDNA，此法不需摸索原始菌株中木聚糖酶基因表达的诱导条件，实现高通量克隆白腐真菌新木聚糖酶基因及全长cDNA。并将所克隆的新木聚糖酶基因利用项目前期工作所构建的高通量、零背景、定向克隆的酵母表达系统进行异源表达，研究多种新木聚糖酶酶学性质，最后对其中1-2个有特色的木聚糖酶进行结构与功能的研究。在生态环境变化导致种群衰退的趋势下，此项目的完成对开发和保护我国的真菌基因资源具有重要意义。