海洋微生物Ⅰ型PKS基因资源的筛选与鉴定

为保护和利用我国东海微生物功能基因资源，选择能生物合成聚酮类化合物的Ⅰ型聚酮合酶（PKS）基因作为研究对象。目前通用方法是在直接提取环境总DNA后，构建宏基因组文库，从中筛选含Ⅰ型PKS基因的阳性克隆，此方法成本高，阳性率低。.本课题提出了用磁珠捕获法富集环境中Ⅰ型PKS基因片段再进行分析、构库的新思路。首先设计针对Ⅰ型PKS保守序列的生物素标记探针；与采自东海海水和沉积物样本的总DNA杂交，使用链亲和素包被的Dynabeads磁珠，高效、快速地富集目的基因片段；所得DNA用针对Ⅰ型PKS的酮缩合酶、酰基转移酶的简并引物PCR扩增目的片段，也可构建富集后Ⅰ型PKS宏基因组库；DNA测序后可进行种系发生分析，同时对其中有价值的Ⅰ型PKS基因进行功能分析和产物结构预测。.本课题将为新型聚酮类化合物的生物合成及异源表达研究打下基础，并将对海洋微生物基因资源开发利用和人民身体健康作出巨大贡献。