NtGNL1在花粉管极性生长中调节后高尔基体转运的机制研究

高等植物花粉管作为典型细胞极性生长的材料，被广泛用来探讨细胞极性生长的普遍机制。囊泡运输与花粉管极性生长密切相关。已知ARF-GEF与其效应物参与调控囊泡的后高尔基体转运，但其机制远未明确。我们克隆了烟草ARF-GEF家族成员NtGNL1，发现其可作用于后高尔基体转运。在本项目中拟进一步明确NtGNL1对特定囊泡的影响；通过标记后高尔基体途径的细胞器，结合囊泡的活体追踪观察，定位NtGNL1作用环节；利用免疫共沉淀和pull-down技术，结合质谱分析，寻找和确认NtGNL1的效应物；以实时定量RT-PCR确定NtGNL1的上下游途径。在此基础上，了解烟草NtGNL1与NtGNL2在囊泡转运中的作用关系，比较NtGNL1、NtGNL2的BFA敏感性及功能差异，探讨该家族基因的进化演变。该项目的研究结果将明确NtGNL1调控后高尔基体转运的具体分子和细胞机制，深化对花粉管极性生长机理的认识。

高等植物花粉管作为典型细胞极性生长的材料，被广泛用来探讨细胞极性生长的普遍机制。囊泡运输与花粉管极性生长密切相关。已知ARF-GEF与其效应物参与调控囊泡的后高尔基体转运，但其机制远未明确。我们克隆了烟草ARF-GEF家族成员NtGNL1，发现其可作用于后高尔基体转运。在本项目中我们在烟草花粉体外培养体系中建立NtGNL1的瞬时反义寡聚核苷酸(ODN) 抑制系统,验证NtGNL1在花粉管中的功能，进一步明确NtGNL1对特定囊泡的影响；以半定量RT-PCR技术，探讨了NtGNL1可能的的上下游途径，结合ITRAQ蛋白定量技术确认NtGNL1的上下游途径，及囊泡运输和微管建成对极性生长的综合影响，此部分的工作还在整理中。此外，我们分离了烟草中的NtGNL2序列，了解烟草NtGNL1与NtGNL2在囊泡转运中的作用关系，比较NtGNL1、NtGNL2的BFA敏感性及功能差异，探讨该家族基因的进化演变,该部分工作尚在进行中。该项目的研究结果将明确NtGNL1调控后高尔基体转运的具体分子和细胞机制，深化对花粉管极性生长机理的认识。