Monophora着色霉黑素激活树突状细胞MelLec引起Treg/Th17失衡的分子机制研究

F. monophora is the etiologic agent of chromoblastomycosis in southern China. Studie showed the unbalance of Treg /Th17 induced by melanin should account for CMB’ chronic infection course, but its mechanism remains unclear. Previously studies showed that melanin dampens Treg/Th17 balance may be directly through the activation of Mellec, while the molecular mechanism needs further investigation. This study intended to verify the relationship between the melanin induced melLce activation and Treg/Th17 unbalance using F. monophora - dendritic cell co-culture model. Furthermore, the metabolic pathways and key proteins of how melanin leading to Treg/Th17 unbalance through Mellec will be revealed, using quantitative proteomics and bioinformatics methods. And on this basis, the metabolic pathways and key proteins will be verified via siRNA technique. This study provides a basis for understanding the pathogenesis of chromoblastomycosis and searching for new targets of antifungal agent.

Monophora着色霉是我国南方着色芽生菌病的主要病原体。研究表明其慢性感染的形成与黑素导致的Treg/Th17失衡相关，然而机制尚不明确。前期实验证实Monophora着色霉黑素对Treg/Th17的调节可能直接通过MelLec的激活，分子机制有待进一步确定。本项目通过构建Monophora着色霉白化株、色素株与树突状细胞共培养模型，验证黑素受体MelLce的表达与Treg/Th17失衡间的关系。其次，利用蛋白组学及生物分析技术，挖掘Monophora着色霉黑素通过MelLec导致Treg/Th17失衡的信号通路及关键蛋白。最后采用siRNA干扰技术，体内外证实Monophora着色霉黑素通过MelLec导致Treg/Th17失衡从而逃逸宿主免疫杀伤的分子机制，为进一步揭示着色真菌病的发病机制并寻找可能的抗真菌药物新靶位提供理论依据。

着色芽生菌病慢性迁延可致残甚至癌变，危害患者健康，其慢性感染的形成与黑素导致的Treg/Th17失衡相关。此项目探讨Monophora着色霉黑素如何通过MelLec导致Treg/Th17失衡，旨在挖掘出其关键信号通路。本项目主要内容包括： 1.利用无脊椎动物及BALB/c小鼠，构建暗色真菌感染模型。2.通过模型及患者病理切片免疫组化分析Monophora 着色霉黑素及MelLec 表达的关系. 3. 构建树突状细胞DC2.4细胞Clecla基因敲除单克隆细胞，通过细胞共培养模型，转录组分析获取关键信号通路。结果显示：成功构建Monophora着色霉动物模型，发现黑素毒力在无脊椎动物及小鼠体内表现不一致。但均获得着色芽生菌的特征性硬壳小体。免疫组化明确着色霉白化株结节中 MelLec不表达，色素株形成的感染性结节MelLec 表达增高。成功构建了DC2.4细胞Clecla基因敲除单克隆细胞，核酸测序结果表明Clecla基因敲除DC2.4 单克隆细胞在sgRNA靶标位点发生突变，并引起了移码突变和翻译提前终止。不同菌株感染DC2.4细胞后，转录组分析发现Monophora着色霉黑素主要影响C型凝集素受体等通路，相关信号通路的验证仍在进行中。本项目对Monophora 着色霉黑素在着色霉的致病机制进行了探索，为后续的研究工作奠定了基础。