腰椎间盘突出症血瘀证血清标志物的质谱鉴定及其血清诊断模型的构建

腰椎间盘突出症(Lumbar intervertebral disk Protrusion,LIDP)，是青壮年腰腿痛最常见的原因，占椎管内疾病的第一位，正确诊断合理治疗对提高疗效极为重要。本项目在前期大量临床实践及从基因水平探讨LIDP血瘀证的基础上，应用表面增强激光解吸/电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）筛选出壮族LIDP血瘀证特异血清标志蛋白，采用高效液相色谱串联电喷雾离子阱质谱（HPLC/ESI/MS）等技术进一步分离、鉴定SELDI已筛选出具有诊断价值的标志蛋白，采用相似性序列分析、特殊位点和区域的识别、二级结构、三级结构的预测及蛋白质功能预测等生物信息学方法获取蛋白质氨基酸序列、基因组定位和序列等信息。从蛋白质组学角度探讨壮族LIDP血瘀证的发病机制及辨证规律，并构建出壮族LIDP血瘀证的血清诊断模型，为应用生物标志物进行辨证及寻找靶标中草药治疗从而提高疗效打下基础。

本项目采用病例对照研究方法、根据样本匹配原则收集腰椎间盘突出症(Lumbar intervertebral disk Protrusion,LIDP)血瘀证患者及健康者外周血的血清样本，应用SELDI-TOF-MS技术筛选LIDP血瘀证特异的血清标志蛋白，再采用HPLC/MS/MS等技术进一步分离、鉴定SELDI已筛选出具有诊断价值的标志蛋白，并构建LIDP血瘀证的血清诊断模型。项目原计划纳入样本总量为160例，即随机抽取临床确诊为LIDP并中医辨证为血瘀证的壮族患者30例为观察组；患者对照组90例分三组：临床确诊为LIDP并与观察组性别、年龄等相匹配的壮族非血瘀证30例一组，确诊为LIDP并与观察组性别、年龄等相匹配的汉族非血瘀证30例一组，LIDP并与观察组性别、年龄等相匹配的汉族血瘀证30例一组；空白对照组包括汉族及壮族健康者各20例，基线资料与患者组相匹配。后在研究过程中得到单位为本项目匹配的科研经费，为增强空白对照组与患者组的可比性，把空白对照组扩大到60例，汉族及壮族健康者各30例。最终纳入结题研究的样本总量为180例。. 首先，项目组按既定统一标准选取30例壮族LIDP血瘀证作为观察组，然后将同期就诊并与观察组患者年龄、性别等基线资料相近的30例汉族LIDP血瘀证作为对照组，开展了壮族LIDP血瘀证血清蛋白质指纹图谱诊断模型初步研究。之后，项目组对按样本匹配原则收集的110例纳入对象开展了广西壮族LIDP血瘀证的血清蛋白质组学研究。然后，项目组按照病例对照研究方法，遵循组间民族、性别及年龄等相匹配原则筛选180例研究对象，开展了LIDP血瘀证的血清蛋白质学研究和壮族LIDP血瘀证血清标志物的质谱鉴定及其血清诊断模型的构建研究。研究结果显示壮族LIDP血瘀证患者的血清中存在多种异常表达的蛋白质，由13个差异表达蛋白及其特定组合构成的诊断模型可区分壮族LIDP血瘀证与LIDP其他中医证型及健康人；运用SELDI-TOF-MS结合HPLC-MS/MS技术建立血清诊断模型为LIDP中医辨证诊断提供了新途径。. 项目研究进展总体比较顺利，基本完成了原定的筛选出壮族LIDP血瘀证的血清标志蛋白并鉴定、构建LIDP血瘀证血清诊断模型、在国家级学术刊物上发表研究论文3篇以上（其中在中文核心期刊上发表2篇）以及培养研究生2名等量化目标。取到了预期的研究成果。