TLR9依赖的p38MAPK信号通路的激活在原发性舍格伦综合征发病机制中的作用

原发性舍格伦综合征（pSS）是一种自身免疫性疾病，研究认为病毒在有遗传倾向的个体中是诱因。病毒含有大量非甲基化的CpG-DNA序列，此序列被TLR9识别后，可以激活p38MAPK信号通路及相关各类促炎症因子，在pSS病情的发生和发展中发挥重要作用。根据预初实验结果，结合p38MAPK信号通路在其他自身免疫性疾病中的作用和TLR9是该信号通路的主要激活因子，本实验提出TLR9依赖的p38MAPK通路的激活是一种重要的pSS的免疫学发病机制。为了证实这一假说，采用SS动物模型，设计相关体内实验予以验证（分析TLR9、MyD88、核心因子p38、底物AP-1及下游细胞因子表达的变化，结合临床表现、自身抗体和病理学分级），进而通过特异性阻断p38MAPK通路对于逆转pSS病理过程和临床表现的干预性实验，为临床治疗pSS提供一种新的思路和方法。

本研究通过借助免疫病理学和分子生物学等综合研究手段，探讨TLR9依赖的p38MAPK信号通路的激活在原发性舍格伦综合征发病机制中的作用，为自身免疫病发病机制的探索及临床治疗提供新的思路。首先，我们确认了TLR9在pSS患者的外周血和唾液腺组织中的表达和定位情况,其中在pSS患者外周血中TLR9的mRNA表达水平是上调的；并且证实在pSS患者中，TLR9阳性细胞主要出现于pSS患者腮腺的上皮岛、淋巴细胞以及导管上皮细胞中，然而在正常人群中，TLR9阳性细胞主要出现于导管上皮细胞。第二，我们发现外周血淋巴细胞中TLR9依赖的p38MAPK信号通路的激活可能在原发性舍格伦综合征发病早期起到重要作用，NOD鼠可用于p38 MAPK 或TLR9抑制实验的动物模型；TLR9和p-p38 MAPK双阳性细胞在NOD鼠PBMCs中表达增高；NOD鼠的刺激性唾液流率相对于对照组Balb/c鼠明显降低；组织病理学结果显示，在2/5的8周龄、4/6的10周龄和所有15周龄的NOD鼠下颌下腺组织中，可观察的导管周围淋巴细胞浸润灶。在对照组Balb/c鼠下颌下腺组织中未发现淋巴细胞灶性浸润现象。 第三，特异性阻断TLR9依赖的p38MAPK信号通路，能改善pSS的临床指标和病理结果。TLR9抑制剂—ODN2088效果最好，能够很大程度地改善NOD小鼠的临床指标—刺激性唾液流率。各组小鼠HE染色病理切片示，氯喹组2只小鼠均还有淋巴细胞浸润灶；VX-702组4只小鼠未发现淋巴细胞浸润灶；ODN2088组5只小鼠中，有1只小鼠有淋巴细胞浸润灶。在HE染色病理切片中，我们发现ODN2088组小鼠和VX-702组小鼠出现腺泡细胞空泡样变，而氯喹组小鼠中未发现这种现象，ODN2088组、VX-702组、氯喹组小鼠心脏血流式细胞仪检测示淋巴细胞数量减少，低于NOD/Ltj组小鼠，甚至低于Balb/c组。