基于EGFR信号通路的“个体化”逆转贝伐单抗耐药的实验研究

贝伐单抗耐药机制不明且干预手段匮乏。表皮生长因子受体（EGFR）信号通路可能与贝伐单抗耐药相关。本研究拟通过基因转染分别建立负载EGFR通路各关键位点突变基因或高表达蛋白的小鼠模型，在此基础上诱导产生贝伐单抗耐药，采用适应性分组的模式，针对不同位点的基因突变或高表达采用相应的阻断药物，探讨"个体化"的"靶向"逆转贝伐单抗耐药的可行性。并首次将Connexin用于血管功能"正常化"的评价，通过与评估血管数量的指标相结合建立较系统的贝伐单抗耐药逆转成功的评价体系，为此后评价肿瘤血管正常化提供合理的应用模型。本课题作为临床前期研究，模拟EGFR通路相关的贝伐单抗耐药的各种可能机制，并提出相应的干预手段，为进一步的开展"个体化"逆转贝伐单抗耐药的临床试验提供了基础。

我们将EGFR-19del和EGFR-21L858R的突变质粒转染入人肺正常上皮细胞系Beas/2b后建立稳定细胞系，然而细胞系对厄洛替尼不敏感，因此我们后续实验选择了成熟的EGFR突变的肺腺癌细胞系PC9和KRAS突变细胞系A549。我们成功的建立了对贝伐单抗耐药的PC9移植瘤模型和A549移植瘤模型，在此基础上发现厄洛替尼或BEZ235+Selumetinib可以分别逆转PC9耐药模型和A549耐药模型。通过RNASeq组学分析，我们筛选出提示贝伐单抗耐药和敏感的基因谱。另外，通过对Connexin系列蛋白的免疫组化分析，我们发现Connexin30表达的动态变化可以预测 PC9移植瘤模型对贝伐单抗的敏感及耐药。而Connexin43及磷酸化Connexin43-S261表达可以提示A549移植瘤模型对贝伐单抗的敏感及耐药。本研究所得到的结果为临床可能的干预策略及机制提供了基础数据。