灸法对逼尿肌反射亢进大鼠C纤维和膀胱胆碱受体作用机制的研究

The urodynamic detrusor hyperreflexia is most common in patients with cerebrovascular disease, urinary incontinence, moxibustion therapy has better curative effect for treatment of detrusor hyperreflexia, but the effect way of moxibustion treatment of detrusor hyperreflexia is not clear. M receptor rich content in detrusor, the excitement is the main driving factors of detrusor contraction. In this study, the use of detrusor hyperreflexia model rats as the research object, the salt separated moxibustion Shenque point, using electrophysiological techniques to observe the rat urinary C nerve fiber discharge conditions, analysis of bladder pressure changes of neural electrical activity changes, the influence of moxibustion God Shenque point on C nerve fibers. Methods by double immunofluorescence, confocal microscopy to observe the effect of moxibustion on Determination of expression of bladder M2, M3 receptor isoforms at the protein level, at the level of genes in bladder mucosa of rats with detrusor hyperreflexia M2, M3 receptor mRNA standard copy number are compared using fluorescence quantitative PCR method, analysis of the M receptor subtype mRNA expression correlation between. The key targets and pathways on the changes of bladder and bladder C fiber M receptor in rats with detrusor hyperreflexia for moxibustion treatment of urinary incontinence, and provide scientific experimental basis for moxibustion in the treatment of urinary incontinence.

逼尿肌反射亢进是脑血管病尿失禁患者最常见的尿动力学表现，艾灸疗法用于治疗逼尿肌反射亢进有较好疗效，但目前艾灸治疗逼尿肌反射亢进的起效途径尚不明确。M受体在逼尿肌中含量丰富，其兴奋是逼尿肌收缩的主要驱动因素。本研究使用逼尿肌反射亢进模型大鼠作为研究对象，以隔盐灸神阙穴为切入点，采用神经电生理技术观察大鼠排尿时C纤维神经放电情况，分析膀胱压力发生变化时神经电活动变化，观察艾灸神阙穴对C神经纤维的影响。通过免疫荧光双标、激光共聚焦显微镜观察的方法在蛋白水平测定艾灸对膀胱M2、M3 受体亚型的表达的影响，采用荧光定量PCR方法在基因水平对逼尿肌反射亢进大鼠膀胱黏膜的M2、M3受体mRNA标准化拷贝数进行比较，分析其与M受体亚型mRNA表达情况之间的相关性。围绕逼尿肌反射亢进大鼠膀胱M受体和膀胱C纤维的变化寻找艾灸治疗尿失禁的关键靶点和作用途径，为灸法治疗尿失禁提供科学实验依据。

前期临床研究结果表明隔盐灸神阙治疗可有效改善中风患者尿失禁、尿频症状。隔盐灸神阙法操作简单，易于学习掌握；具有较大的社会效益及推广应用价值。但目前灸法治疗尿失禁报道多偏重于临床研究，对其作用机制探讨较少。本研究围绕逼尿肌反射亢进模型大鼠膀胱C纤维和膀胱M2，M3受体为研究方向，以隔盐灸神阙穴为干预手段，探寻艾灸治疗尿失禁的关键靶点和作用途径，为今后临床有针对性地制定卒中后尿失禁灸法选穴方案提供科学实验依据。.结果及关键数据：与假手术组相比，模型组大鼠排尿间隔时间明显缩短，差异有统计学意义（P＜0.05）；与模型组相比，艾灸组大鼠排尿间期显著延长（P＜0.05）；艾灸组与假手术组相比无明显差异（P＞0.05），提示艾灸可以延长DH大鼠排尿间隔时间。与假手术组相比，模型组大鼠M2受体蛋白表达明显增加，差异有统计学意义（P＜0.05），而M3受体蛋白表达变化不明显（P＞0.05）；与模型组相比，艾灸组逼尿肌M2受体蛋白的表达明显减少，差异有统计学意义（P＜0.05），而M3受体蛋白表达变化不明显（P＞0.05）；假手组与艾灸组相比，均无明显差异（P＞0.05），提示艾灸可以降低DH大鼠逼尿肌M2受体蛋白的表达。与假手术组相比，模型组大鼠盆传入神经兴奋性显著增强（P＜0.01）；与模型组相比，艾灸组大鼠传入神经兴奋性均显著减弱（均P＜0.01），提示艾灸可以降低传入神经C纤维的过度活动。.本研究从机制上探讨灸法治疗脑卒中尿失禁的作用机理，该研究提示：艾灸可能是通过抑制辣椒素敏感的传入神经C纤维过度活动；艾灸能够抑制大鼠膀胱M2受体的过表达，发挥抑制膀胱过度收缩的作用。说明M2受体可能是改变膀胱传入神经活性，改善膀胱活动的重要靶点。该研究从传入C纤维和膀胱胆碱受体(M受体)调节机制两个靶点入手，部分揭示了艾灸治疗中风后尿失禁的机制，具有重要的临床及现实意义。