涎腺硝酸盐转运通道在颌面部表达及其与一氧化氮相关性研究

硝酸盐- - 亚硝酸盐- - 一氧化氮（nitric oxide ，NO）途径具有非常重要的生理功能。本课题组前期研究发现涎腺是调节机体硝酸盐代谢的重要器官，SLC17A5是涎腺硝酸盐转运通道。SLC17A5在口腔颌面部的表达和分布还不清楚，其与NO相关性研究还未见报道。本研究旨在通过免疫组织化学、免疫荧光、激光共聚焦、Western blot及RT-PCR等方法研究SLC17A5在口腔颌面部的表达、分布和亚细胞定位。通过SLC17A5基因过表达、SLC17A5基因静默、离子对高效液相色谱、NO探针等方法研究SLC17A5、硝酸盐、NO、一氧化氮合成酶的相互关系，以及反馈机制。通过建立涎腺、颞下颌关节、牙周疾病动物模型研究硝酸盐- - 亚硝酸盐- - NO途径与口腔颌面部疾病的关系。有望明确SLC17A5在颌面部的定位及其与NO的关系，为口腔颌面部疾病诊断和治疗提供新的思路和方法。

哺乳动物硝酸盐转运对于维持机体一氧化氮的平衡具有重要的作用，血液中硝酸盐被唾液腺主动摄取并分泌进入唾液。我们在国际上首次确定Sialin（SLC17A5）为哺乳动物硝酸盐的转运蛋白。在此基础上，我们继续开展Sialin（SLC17A5）在口腔在颌面部表达及其与一氧化氮相关性研究。主要从以下三个方面开展研究：1、Sialin（SLC17A5）在口腔颌面部及全身的表达研究；2、Sialin转运硝酸盐与一氧化氮相关性研究；3、唾液腺硝酸盐分泌与一氧化氮相关性研究。结果显示：1、Sialin（SLC17A5）在唾液腺（腮腺和颌下腺）、大脑和肝脏中高表达，在动脉和静脉组织中也有表达。Sialin在唾液腺腺泡上皮主要定位于基底膜和侧膜，而导管上皮中主要定位于顶膜。Sialin在动脉和静脉主要定位于血管内皮。2、离体唾液腺上皮细胞及血管内皮细胞可通过Sialin摄取硝酸盐进入细胞内，高浓度硝酸盐在细胞内可以通过非一氧化氮合成酶（NOS）途径转化为一氧化氮，低浓度硝酸盐在细胞内无法通过非NOS途径转化为一氧化氮。3、通过Sialin（SLC17A5）突变基因H183R转染可以有效地抑制离体唾液腺上皮细胞摄取硝酸盐。通过经唾液腺导管逆行转导H183R，小型猪唾液腺分泌硝酸盐的能力下降1/3。通过结扎大鼠唾液腺导管可以阻断绝大部分唾液硝酸盐进入消化系统，由于唾液硝酸盐转运被阻断，大鼠胃内硝酸盐（Nitrate）、亚硝酸盐（Nitrite）、一氧化氮（Nitric oxide，NO）随之下降，导致胃血流下降，易于导致应激性胃溃疡。头颈部放疗导致小鼠唾液腺分泌硝酸盐的能力下降2/3，胃黏膜及黏膜下组织一氧化氮合成酶（NOS）表达显著增高。如果在以上动物饮水中补充硝酸盐，胃内硝酸盐、亚硝酸盐、一氧化氮和NOS会逆向变化。以上研究表明，Sialin（SLC17A5）是唾液腺转运硝酸盐的主要转运蛋白，在唾液腺主要行使转运血液硝酸盐进入唾液，唾液硝酸盐分泌进入消化道的功能。在胃内这种特殊条件（低PH值）下，唾液硝酸盐不仅可以影响Nitrate-Nitrite-NO通道，也可以影响NOS-NO通道。而在其他特殊条件下，如组织缺血、缺氧条件下，Sialin（SLC17A5）与硝酸盐及一氧化氮研究还需要进一步研究。