V-ATP酶B2亚基对（前）肾素受体致肾脏纤维化的调控作用和机制研究

The (pro)renin receptor ((P)RR) activation plays a key role in the development of renal fibrosis, but the mechanisms is unknown. The transmembrane and cytosolic domain of (P)RR has been shown as accessory subunit of the vacuolar-type H(+)-ATPase (V-ATPase). Our previous study revealed the upregulation of surface expression of B2 subunit of V-ATPase play roles in renal fibrosis. Further study showed that interaction of B2 subunit may have an interaction with (P)RR, which may contribute to renal fibrosis. This study will reveal the role of V-ATPase B2 subunits in regulating overexpression of (P)RR on the plasma membrane activated by (pro)renin, which promotes profibrotic factors (TGF-β)expression. Then this study will further identify the functional domains of B2 and (P)RR that mediate their interaction and the regulated signal pathways. Identification and characterization of these pathways will provide better understanding and noval insights into V-ATPase functioning on renal fibrosis, and help us to provide the new noval candidate targets for preventing renal fibrosis throught reasonable blocking renin-angiotensin system.

（前）肾素受体[(P)RR]过度激活在促进肾脏纤维化的发生和发展中起着关键作用，但其调控机制尚不清楚。近年研究证实(P)RR的跨膜和胞浆片段是囊泡型H+ -ATP酶（V-ATP酶）的辅助亚基。我们前期研究证实V-ATP酶B2亚基在胞膜表达增强参与了肾脏纤维化过程；并且发现V-ATP酶B2亚基和(P)RR可能存在相互作用，它们作用的增强可能参与了肾脏纤维化进程。本项目拟进一步采用基因切除、点突变等分子生物学技术，证实V-ATP酶B2亚基是否通过与(P)RR的相互作用调控(前)肾素激活后(P)RR胞膜过表达，从而促进TGF-β等促纤维化因子表达；并获取两者相互作用的功能基团和调控机制的可靠证据，以上努力将为丰富V-ATP酶参与和调控肾脏纤维化的功能提供全新的认识，为更有效地阻断肾素血管紧张素系统的病理作用防治肾脏纤维化提供新的靶点。

（前）肾素受体[(P)RR]过度激活在促进肾脏纤维化的发生和发展中起着关键作用，但其调控机制尚不清楚。(P)RR的跨膜和胞浆片段是囊泡型H+ -ATP酶（V-ATP酶）的辅助亚基，我们的研究发现V-ATP酶B2亚基在胞膜表达增强参与了肾脏纤维化过程。本研究率先从(P)RR与V-ATP酶B2亚基的相互作用的角度上探讨肾脏纤维化的机制。结果发现，大鼠肾间质纤维化UUO模型（前）肾素、(P)RR、V-ATPase各亚基表达明显增加，而且(P)RR和V-ATPase B2亚基呈现显著共定位并向细胞顶膜聚集。体外培养的NRK52E也发现B2亚基和(P)RR存在相互作用，且在前肾素刺激后显著增加。V-ATP酶特异性抑制剂bafilomycin A1可改善前肾素刺激后细胞形态的改变，以及下调(P)RR、α-SMA和FN的表达；通过siRNA阻断V-ATP酶的B2亚基或(P)RR都可以显著减少前肾素诱导的α-SMA和FN的表达。本研究结果提示V-ATP酶的激活参与了（前）肾素刺激后(P)RR相关的肾小管间质纤维化的过程，而且V-ATP酶的B2亚基和(P)RR之间的相互作用可能在该过程中发挥了重要的作用。本研究为V-ATP 酶自身亚基结构在调控肾脏纤维化的作用增加新的内容，为更有效地阻断RAS系统过度激活防治肾脏纤维化提供新的靶点和思路。该结果已发表（Scientific Reports 2016,6:25035）。为了进一步在疾病中验证研究的发现，以IgA肾病，这一我国最常见的原发性肾小球疾病为疾病模型。初步研究发现 (P)RR在IgA肾病患者肾小管上皮细胞表达，且在肾间质纤维化病变显著处表达增强，同时V-ATP 酶的B2亚基表达也增加，两者存在共定位关系。这提示前肾素受体(P)RR与V-ATP酶的B2亚基相互作用可能在IgA肾病患者肾间质纤维化进程中发挥作用。其次，利用miRNA基因芯片技术筛查出与IgA肾病患者RAS抑制剂治疗反应相关miRNAs，特别是miR-150-3p，进一步靶基因预测发现它可以调控RAS系统组分基因ACE和AGTR2。这些发现为包括IgA肾病在内的肾脏疾病实现优化RAS抑制剂治疗效应提供新的思路，也将为阻断RAS的病理作用防治肾脏纤维化提供新的线索。